实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问WB内参很奇怪，用的actin

bamboopiggy

不知道你跑胶的时候，条带齐不齐，如果跑胶的时候齐，感觉还是转膜的时候出来问题，不是加抗体孵育的问题。因为颜色够深。

4 回答759 围观

问救救孩子的WB

bamboopiggy

不知道你的问题是什么？是问有些条带背景深么？有的时候抗体特异性不是那么好，会出现背景，但是如果不影响你的结果的趋势的话，可以用。

3 回答429 围观

问Touch Down PCR?

bamboopiggy

touch down pcr本来就是为了更好的得到实验结果才加的pcr程序，不需要优化，一般你把 touch down的annealing temperature 设置从55-65之间，就可以。如果说你的primer的Tm值太高，也可以适当的把annealing temperature的范围提高一些

2 回答2503 围观

问谷氨酸棒状杆菌基因整合

Eason老歌迷

不用!不用加终止子，你加完之后他有的基因没表达会有影响的。

1 回答305 围观

问H9C2细胞用cck8做细胞生长曲线出现的问题

Eason老歌迷

感觉是你的个人操作问题。另外提个建议，做生长曲线为什么用CCK-8？直接对细胞计数多直接可靠？我建议你用细胞计数法，最具有说服力，谁也不会有疑问。平行养多皿细胞，每间隔一段时间收细胞计数，每个时间点3次重复。做个折线图，很方便的。

3 回答1861 围观

问Cck8与六孔板结果相反

Eason老歌迷

不知道你有没有看过一篇文献，药物积聚程度与细胞死亡相关。还有一种可能，我觉得是不是你在6孔板中加药的浓度没有计算好。

3 回答617 围观

问做定量pcr 的时候，跑出的数据要怎么计算相对值

bamboopiggy

用ΔΔct法，你直接套进去，然后放到excel里面处理就可以。

2 回答314 围观

问qPCR重复性和结果处理

bamboopiggy

1、实验性重复，是指每次实验，每个样品，针对每个基因要有最少三个复孔。不用12个，也不用重复三天。2、①这个都可以，看你想怎么处理。②3个复孔取平均值。3、你的实验结果可以，但是太费了，你只要做3个复孔，做一天就可以。

3 回答7859 围观

问我在做实时荧光定量PCR的时候，我是先设定好样品和目标名称，一共两个目标基因，两个内参。但是我跑完就变成一个内参，其中一个内参

bamboopiggy

可能是你设置的问题，一般的realtime pcr仪都可以在跑完后，设置样品和目标名称的。

3 回答199 围观

问小鼠骨髓间充质细胞培养

Eason老歌迷

看着还行，状态还行。刚提取出来的时候，用PBS洗涤贴壁细胞（第0代），每3-4天加入新鲜培养基；初始贴壁纺锤形细胞第3天显示为单个细胞；在4-8天内，培养物变得更加清晰，并在2周内达到65-70％的影响；在这个阶段，培养物通常表现出两个特征：首先，平板可能含有不同大小不同的成纤维细胞集落; 第二种可以包含散布在细胞集落之间或之上的非常少量的造血细胞。

1 回答574 围观

问RAW264.7细胞的M2极化方案

dxywode

变化没有LPS刺激大，前段时间有个做巨噬细胞的老师建议我不要用细胞株做M2型，用骨髓细胞做。

2 回答4536 围观

问TCID50结果在稀释梯度高的孔忽然出现异常阳性，是污染吗？

Eason老歌迷

可能是研磨裂解不充分，让病毒颗粒没有完全释放出来，聚集导致后面孔有阳性。

2 回答446 围观

问乳鼠成纤维细胞培养问题讨论

Eason老歌迷

大部分都是用高糖DMEM，但我最近用低糖培养细胞时，也未发现有明显不同。他们之间就只有糖份的含量不同，其余是完全一样的。

2 回答524 围观

问求细胞生长

Eason老歌迷

一般刚开始做的话你就可以做6纵列，每列5个副孔。96孔板的每个孔上，加入100微升的细胞悬浮液。把它从左边加到洞底。加入一半板材后，与未加入的细胞悬浮液混合，然后继续加入剩余的一半板材。盖上盖子后，用左手轻轻握住木板的左边，然后用右手轻拍木板的右边缘。注意力集中在力量上(通常敲击它三次)。太多或太多次会导致细胞堆积。顺时针转动盘子(逆时针方向不好) ，将剩下的三面逐一拍打，静置5分钟左右，然后放入

3 回答306 围观

问角蛋白10，分子量50，出现这种情况不晓得什么原因，各位大佬们，救救我吧！

Eason老歌迷

一个是背影有点脏，建议你封闭时间长一点。二是你Western转膜液要用新鲜的，不然转膜效果不好。三是抗体孵育时间可以久一点，抗体浓度别太浓。

3 回答250 围观

问低分化PC12

Eason老歌迷

看着不像是真菌感染，我觉得可能是细胞团，真菌丝形状不是这样的。

2 回答405 围观

问求助：小鼠原代肝星状细胞提取！！！

Eason老歌迷

给你分享一下我的提取方法吧，说不定对你有所帮助。先原位灌注:1、1ml5%水合氯醛麻醉大鼠，腹壁酒精消毒，十字切口打开腹腔，用湿棉签将肠管推向左侧，暴露门静脉和下腔静脉。2将充满灌流液的针经小口插入门静脉，止血夹或线结扎，软管部分用纸胶布固定以免滑脱。3、灌注I液灌注在肝脏迅速发白后前断下腔静脉，肝脏在全部灌注完后可见白色纹理。可以注射器灌注，也可以使用专门的大鼠灌注器。先灌注液:5min37度\

2 回答3167 围观

问【求助】取材小鼠大脑杏仁核

bamboopiggy

你可以去视频网站找找看，我取的时候，是从大脑底部，先取丘脑，然后海马和杏仁核

2 回答4833 围观

问原代脂肪干细胞在显微镜下看有很多贴壁的，一换液就没有了。这是因为贴壁的是其他细胞还是贴壁不劳啊？

Eason老歌迷

可以从下面几个方面考虑，1，是不是你的双抗浓度太高了呀，2你的细胞是第几代了，若原代，换液时应轻柔一些，若代数较高，是不是细胞的增值速度慢了呀，3，应考虑一下你的细胞的接种密度。

2 回答541 围观

问时间的选择

Eason老歌迷

是的，这么设置是正确的，这个和凋亡的过程有密切关系。凋亡一般是前期由外部（受体介导的）途径涉及受体结合、激活起始caspase酶（ caspase-8）、caspase-8继而激活caspase-3或者切割Bcl-2家族成员Bid，从而放大caspase-3的激活效应；Bid的切割导致细胞色素C漏出、蛋白复合体（也称作凋亡复合体）的形成，以及caspase-9的激活（3）。内部固有（线粒体介导的

2 回答399 围观

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