实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问蛋白跑胶

bamboopiggy

可能是你蛋白的浓度太高了，或者是蛋白出现降解了。

3 回答313 围观

问求助各位大神，帮我看看qpcr扩增曲线太奇怪了，有负的荧光信号，但是溶解曲线是好的，

Eason老歌迷

你这是有溶解曲线，无扩增曲线。可能是反应程序问题，扩增阶段未收集荧光信号。建议你检查程序设置。

3 回答348 围观

问HEK293f细胞培养抱团

Eason老歌迷

可能是以下原因导致它抱团。状态不好、老化的细胞，也可能会出现抱团生长的情况（比如换液不及时、长的太满才传代、污染等造成的细胞状态差）。传代时没有吹打均匀，细胞团多，培养时就会是一团一团的。接种不均匀，或者是细胞未消化开。非震荡培养或细菌（胞）量过多的话就会成团。

2 回答1907 围观

问求助：hek293t 做mtt,加完mtt孵育后吸走原液总是把甲瓒也吸走

Eason老歌迷

你是把死细胞吸走了吧，你可以吸的时候慢一点轻一点。你可以换成cck8法，或者直接做细胞计数也行。

3 回答480 围观

问取材完来不及做流式的组织如何保存呢？-80可以吗？

bamboopiggy

绝对不能-80，一旦-80.你就没法再用了。流式一般用新鲜的细胞，实在做不完，你放4度保存都比-80好

2 回答1483 围观

问求助求助

Eason老歌迷

香豆素衍生物可抑制铜绿假单胞菌毒力因子的产生，中国知网和PubMed上都有文献介绍。

1 回答182 围观

问乳酸脱氢酶释放实验遇到的问题

Eason老歌迷

我之前也遇到过这种情况。需要注意一下各组细胞接种密度是否均一，生长状态是否一致。一般细胞种板时应不断摇晃细胞悬液使之密度均一，另外注意每组细胞各孔OD值是否相差很大，如果标准差太大，则样本不能很好的代表总体。如果这些都没问题，就应该注意一下药物的配制问题，药物配制的时间（时间过久可能失效）、纯度（纯度不高会影响药效）

1 回答461 围观

问我要在六孔板用药物处理血淋巴细胞，之后该怎么提RNA呢，需要将液体都倒掉再加trizol提取吗

Eason老歌迷

肯定是先等细胞生长贴壁一段时间，加药，然后去除培养基，pbs洗一下，再加trizol来提rna啊！

1 回答432 围观

问离子交换时为什么要降低盐浓度啊

Eason老歌迷

1、低盐可促进蛋白盐溶；2、低盐可使与层析柱吸附弱的杂蛋白穿透层析柱，可能增加洗脱液的目标蛋白纯度，或增加层析柱对目标蛋白的载量。

2 回答1418 围观

问想问一下各位大佬，离子交换过程中，为什么要降低盐浓度啊？？

Eason老歌迷

1、低盐可促进蛋白盐溶；2、低盐可使与层析柱吸附弱的杂蛋白穿透层析柱，可能增加洗脱液的目标蛋白纯度，或增加层析柱对目标蛋白的载量。

2 回答456 围观

问请问，这是HCT15细胞，这个给个的团块不会移动，是什么污染吗？好奇怪呀

Eason老歌迷

你的图没有上传上来。可能你这个细胞培养皿里的团块是传代没有传均匀，细胞成团了，并不是污染。

2 回答186 围观

问测定C57bl/6J 小鼠的免疫能力，可以测量那些指标

Eason老歌迷

C细胞，T细胞，巨噬细胞，免疫球蛋白A、免疫球蛋白M、免疫球蛋白G、补体C3、补体C4、C反应蛋白、类风湿因子

3 回答523 围观

问CD3+CD49b是NKT细胞吗

Eason老歌迷

一般将CD3- NK1.1+或者CD3- CD49b+细胞定义为NK细胞。

2 回答923 围观

问如何将转录组学结果和分子对接联系起来，确定一个靶蛋白？

Eason老歌迷

文献调研是必经步骤，而且也是确认研究项目是否适合分子对接的最快方法。研究者可以通过PubMed等免费文献数据库，输入自己的靶标+分子对接关键词。或者是去蛋白结构数据库（Protein data bank, PDB）是目前全球最大、信息最全的蛋白晶体结构数据，目前已经报导的结构靶标都在蛋白结构数据库上有收录

1 回答548 围观

问EMSA实验求助谢谢大家

Eason老歌迷

看不到shift带可能是标记的DNA探针量太少或者探针有降解。某些蛋白和探针的结合条件比较特殊，需要优化结合体系。蛋白样本提取质量不高，蛋白降解或者提取量不足。样本中没有可以与探针结合的蛋白。探针与蛋白无特异性的相互作用。转膜效率低，蛋白或者探针未转移到膜上。

1 回答525 围观

问扩增曲线出现这种问题是什么原因

Eason老歌迷

可能是你的PCR参数设置错误。可能是你的模板降解: 避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。可能是你的引物或者探针降解：可通过PAGE电泳检测其完整性。

3 回答181 围观

问一代测序引物和PCR扩增引物的区别？

Eason老歌迷

测序引物分自带引物和通用引物，自带引物为客户自行设计的PCR扩增引物或者载体及目的片段上设计的引物进行测序。PCR引物又称为寡核苷酸引物，也就是RNA，是由人工合成的，分为两种，引物1和引物2。由于DNA聚合酶只能从核苷酸链的5'端到3'端进行复制，也就是只能识别3'的尾端。

3 回答1210 围观

问【求助】双荧光素酶实验结果和荧光定量结果相反

Eason老歌迷

不应该啊，我觉得可能是你的实验操作有问题。双荧光素酶报告实验还是很准确的，采用萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶组成，实验过程中萤火虫荧光素酶与基因表达的特定实验条件有关，海肾荧光素酶用来做转染的内参，以校正不同样品之间转染的转染效率。

1 回答794 围观

问TCR cross-linking，T细胞受体交联什么意思？

Eason老歌迷

TCR由两条多肽链组成（α/β或γ/δ），每条链分为恒定区和可变区，且每条链包含及个高度可变区CDR1（complementarity－determining regions，CDR，互补决定簇1）、CDR2、CDR3。其中CDR3是TCR直接接触抗原肽的区域，对TCR与抗原肽-MHC复合体的互作起到决定性作用，且CDR3是可变程度最高的区域，很大程度上决定了TCR的多样性。受体交联就是抗体可通过

1 回答2141 围观

问重组质粒电转入植物乳杆菌

Eason老歌迷

如果说P了但没有P出来条带，大概率就是没转进去。你这个可能是时间太短的原因，因为我看你感受态制作的没啥问题。

1 回答1174 围观

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