实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问chip实验问题

Eason老歌迷

看了他的图，觉得是基因组DNA降解了或者根本没有提取出来。因为都没有看到DNA样品，亮带大小都在1200bp一下显然不是基因组DNA。

1 回答640 围观

问FC载体构建

Eason老歌迷

是的，每次做抗原还要进行酶切去除，那也太麻烦了。换成羊驼的FC可以省去酶切这一步试一试，看看效果。

1 回答614 围观

问求问Coip后质谱分析结果中蛋白评分多少比较可信啊？

Eason老歌迷

如果验证三次都没有验证出来，可能是假阳性，这种结果不太可信，过不了审核。

1 回答636 围观

问求助｜red同源重组，打靶片段连接不上

Eason老歌迷

可能有几个原因，red同源重组失败一般是因为DNA链断裂，还有可能是是同源臂太短（＜13 bp）没有连接活性，连接不稳定，会断开。或者是同源臂不在载体末端，重组酶切不到可以连接的序列位置，连不了

1 回答1154 围观

问求助大佬，小鼠的流氏细胞术检测

Eason老歌迷

不可以用脾脏代替血液来做流氏!还有就是小鼠做淋巴细胞分群必须经过刺激培养，最好是按照操作说明书来，不用图省事。

1 回答459 围观

问求助：小鼠皮肤表皮真皮分离

Eason老歌迷

可以浸泡过夜后，用手术刀刮除表皮。刮下的表皮可用于分离表皮细胞，每只小鼠可得到约3x10个表皮细胞。然后将真皮剪碎，0.25%的胶原酶37℃消化至少1h，在处理真皮细胞。

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问MA104细胞感染病毒

Eason老歌迷

具体可以参看这个文献，”轮状病毒感染诱导MA104细胞感染相关蛋白的分析鉴定”。感觉是你细胞生长状态不好，都老化死亡了。

1 回答1023 围观

问大鼠心电问题

Eason老歌迷

可能会影响对结果判定的准确性，大鼠标准肢体导联比较杂乱，对心肌缺血的判定也很不是很敏感。可以用胸导联试一试，你可以找3只5.1K或5.6K的精密电阻（误差<0.5%）。将3只电阻的一端绞在一起，接生物放大器输入“－”极。生物放大器输入“＋”极，接胸导联的某个部位，如V3或V4。生物放大器输入“地”极，接动物右下肢。这样就可得到比上述ECG漂亮的胸导联ECG图

1 回答197 围观

问大鼠怀孕

Eason老歌迷

一般我们都是用棉签蘸取法，然后涂片，染色，观察。

1 回答423 围观

问如何获得抗体的可变区序列？

Eason老歌迷

具体可以参看这篇文献，”一种结合SOLID测序和单细胞RT-PCR的人抗体可变区获取方法”。还有这篇也详细讲解了过程”抗RET突变体蛋白单克隆抗体可变区序列的制备方法与流程”。

1 回答546 围观

问关于CD11b和Iba1标记活化的小胶质细胞

Eason老歌迷

cd11b和iba1组合标记可用于区分小胶质细胞与巨噬细胞。静息小胶质细胞表面标记物为 CD11b。

1 回答3965 围观

问内质网荧光染色证明内质网应激

Eason老歌迷

具体可以参看这篇文献，讲的很清楚，”内质网特异染色法在内质网应激评价中的作用”

1 回答964 围观

问求线粒体自噬特异性抑制剂

Eason老歌迷

1 回答1575 围观

问关于stat3的抑制剂sh-4-54的使用情况

Eason老歌迷

好的。SH-4-54是一种高效的STAT抑制剂，其作用STAT3和STAT5的KD分别为300 nM和464 nM。用于体外研究的话，SH-4-54在人恶性胶质瘤脑肿瘤肝细胞(BTSCs)中表现出空前的细胞毒性，而在人类胚胎星形胶质细胞中没有毒性。此外，SH-4-54有效抑制STAT3磷酸化和其下游转录靶点。用于体内研究的话， BT73原位异种移植的小鼠体内，SH-4-54 (10 毫克/千克，

1 回答408 围观

问问p-gp逆转耐药实验阳性对照药为什么都选维拉帕米？

Eason老歌迷

因为最开始发现的第一代p—gp抑制剂就是它啊，第一代P-gp 抑制剂是一批以钙离子通道抑制剂维拉帕米和免疫抑制剂环孢菌素A为代表的口服药物。还有普罗帕酮、奎尼丁、红霉素、氯丙嗪、咖啡因、利血平、育亨宾和他莫昔芬等等。基于人空肠切片做实验，发现奎尼丁、环孢菌素A 和维拉帕米增加了空肠中罗丹明123 的累积，即这3 种药物使罗丹明123 的AUC 增加了，并且罗丹明123 的累积量的增加呈浓度相关性。

1 回答454 围观

问western blot，请问电泳的时候总是有这些尾巴是为什么

Eason老歌迷

细胞样本的话是残存血清的原因，其次是制胶的原因，另外上样过多或者上样时候吸取的不全是上清也会造成。

4 回答334 围观

问遇到一个病例，APTT一直100多，用当天凝血正常的血浆10人做正常混合血浆

Eason老歌迷

建议你参看一下这篇文章，鼓楼医院写的，”《出血与止血系列讲座》第三讲：凝血实验中的APTT纠正实验”。我之前也遇到过一个这样的情况。

2 回答408 围观

问请教各位大神这是什么菌污染

Eason老歌迷

可能是黑胶虫污染。在细胞培养的时候,有时会在400倍显微镜下看到小黑点在动,小黑点有时呈点状,有时呈小的片状,运动形式为在原地振动（类似布朗运动）。

3 回答221 围观

问求助各位大佬，纯蛋白过离子交换柱前平衡柱子时为什么要用高低盐平衡？为什么要降盐啊？

Eason老歌迷

有利于纯化啊。不同的离子团跟柱胶的结合能力不同，盐梯度洗脱可以使结合能力不同的离子团逐步洗脱，常用于不同蛋白的分离纯化。

1 回答603 围观

问ROS检测

whilt-shirt

有可能是高浓度导致细胞全死了导致的

2 回答1423 围观

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