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科研学霸天团,48小时有问必答
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蛋白表达
whilt-shirt
有可能是未裂解完全,建议重新裂解试试
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问
冰冻切片在沉糖过程中用的30%的蔗糖不小心用蒸馏水配置了,
balalaLy
dd水和pbs我都试过,好像没什么影响,都能做出相似的结果
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问
求助:如何用计数法测细胞生长曲线
whilt-shirt
这种情况还是选用培养瓶或者培养皿吧
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问
WB结果
bamboopiggy
1.分装时要混匀,2,你上样的枪尖可能有差异,3,胶配的有问题,4,转膜有问题。5,抗体加的不匀
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问
细胞中出现黑色团块
麻黄连翘赤小豆
染菌了血清或者培养基的杂质,做个空培试一下单纯的细胞长快,多了,传代频次增加
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问
免疫组化结果
申东熙老伯
可以试着提高一抗浓度,加长染色时间。
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问
【求助】PBMC培养污染?
此用户已注销
培养基白色絮状物是在培养基配制完成后没有及时包扎灭菌,是微生物作用所致,也是培养基不同成分之间发生反应所致。总之,培养基配制过程中就需要打开灭菌锅了,尽快灭菌,就不会有白色絮状沉淀了。
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问
科研小白请教一下,这个snu387细胞是污染了?
麻黄连翘赤小豆
圈出来的大块的可能是血清里面的杂质,没关系,换液可去除,亮晶晶的地方可能是细胞增殖的部分,也可能是杂志,我没看到细胞间黑黑的东西,如果会动说明细菌感染了,不会动就要考虑支原体或者其他感染
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问
多片段无缝克隆一直连不上怎么办?
bamboopiggy
画好组合成的质粒图,然后一个片段一个片段的对引物,一般这种情况就是引物出问题了。还有就是在连接的时候,你可以把短片段的多放一些。
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问
请问各位大佬,在肺匀浆细菌涂板计数时,看到文献里有单位是CFU/mouse的,这是咋计算的呀,一般不是CFU/ml吗
balalaLy
涂板匀浆是按照组织g/ml来算的,最后数菌落也是按照CFU/g组织
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问
在进行底物TMB溶液显色后,酶标板中的孔有颜色但没有梯度,背景较高,常见原因有哪些?
此用户已注销
出现该现象的可能原因有底物溶液TMB未置于阴凉避光处保存,实验前溶液已经变蓝。孵育温度过高或者孵育时间过长,发生了较强的非特异性吸附。没有按说明书要求洗板,特别是洗板时洗涤液的量少加了。加样时没有换枪头造成交叉污染。
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问
各位大侠求助,最近在做RT-LAMP实验,采用荧光的方法,但是阳性和空白都有荧光曲线,只是空白起峰晚一些,这是污染还是引物的问题
Eason老歌迷
如果阳性和空白都有荧光曲线,但是空白起峰晚一些,我感觉是引物的问题。
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问
免疫共沉淀怎么才能去除IgG重链和轻链的条带?
冷泉港蛋白
1.首先看下原理:你可以选择原理二的试剂盒,看看是否可以解决你的问题2.调整胶浓度,或更换其他缓冲体系的PAGE,使轻链与目的条带分离开。3.就是调整抗体的种属了,不讨论了。4.应该有那样一种二抗,与变性的一抗不反应,只与天然的一抗反应,市场应该有吧?
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问
免疫荧光实验出现杂点?
junyong151
常见的原因其他老师都提到了,还有一点就要考虑一下自己所用的洗片子的溶液是否有结晶等东西造成了这种非特异性的染色,我们可以过滤一下溶液,看看是否可以去除这些杂质。
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问
关于大鼠软骨细胞的II型胶原免疫组织化学染色问题?
此用户已注销
免疫荧光染色出不来,有可能是一抗的问题。
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问
免疫组化的实验阳性很弱怎么办?
bamboopiggy
可以尝试增加一抗浓度,最好能加一个阳性对照。
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问
糖尿病实验中Y-氨基丁酸是第一个既能刺激细胞增生,还能避免细胞被免疫破坏的介质吗?
Eason老歌迷
是的。实验通过给小鼠注射了γ-氨基丁酸的物质,结果显示它可以让已经患上糖尿病的小白鼠的病情得到逆转,甚至达到临床治愈。实验还表明这种γ-氨基丁酸物质可以有效的预防糖尿病发生。国际最权威的糖尿病研究机构之一、发明胰岛素的实验室、多伦多大学班廷贝斯特糖尿病研究中心主席高度评价这项成果,他认为:“γ-氨基丁酸是第一个既能刺激β细胞增生,又能避免β细胞被免疫破坏的介质。”
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问
做PCR时只加一种引物,琼脂糖凝胶电泳可以跑出来条带吗
huang282815
加一种引物一般是没有条带的,一般是加一对引物
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问
在做免疫荧光实验时,怎么消除背景荧光?
风闲少年
尽可能冰冻切片吧,然后每次清洗都要有三次,做好阴性对照,只加二抗那一组。
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问
TGF-β1造内皮间质转化模型
风闲少年
目前HUVEC培养使用EGM2培养基,里面的血清可以先不加血清,使用kit中的其他因子。
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