多重免疫荧光出现通道串色的情况，如何降低串色跟非特异性荧光着色！

要是有串色，你可以尽可能选择无光谱交叉的荧光素。或者是荧光强度太高，也有可能导致光谱交叉的问题出现，可适当的降低抗体浓度、孵育时间等方法解决。可以使用序列扫描的方法拍摄:这个根据具体的显微设备做调整。或者是改变激发光波长强度:可以通过降低激发光的强度、减少光电倍增管效能等方法。

1. 选择波长差异较大的染料；2. 在仪器上调好校正，或者在流式相关软件上进行调整（如flowjo的校正矩阵）；3.关于非特异性着色，首先细胞跟抗体孵育后，充分用PBS清洗，并选择着色特异性较好的抗体品牌，必要时染完一种色后进行封闭处理。

1.成像的时候缩小激发光的波长范围

2.减少二抗浓度和染色时间，可以试试1:2000室温半小时

避免非特异性染色一是要封闭，二是一抗种属最好选择跟标本不同来源的。多重荧光串色一方面是机子硬件的调配，二是选择二抗的时候尽量选择不同波长且间距比较大的。

这种情况可以试试降低抗体浓度。