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问
Graphpad prism9 怎么做出来下面的图,横坐标只显示两个变量,而不是每个柱状一个
balalaLy
可以的,新建的时候选择group,录入数据时,细胞分组输入到左侧纵列表,实验分组录入横向group列表
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问
求助:WB转膜(0.45)后MARKER变淡很多
dxy_ql0su1t7
分子量大的蛋白和marker需要转时间更长才能到膜上,0.22的膜孔小,适合小分子蛋白转膜,如果有大分子和小分子同时转膜建议分开转
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问
wb内参无条带
哎呀呀呀呀哎
抗体用的对吗?一抗为啥抗鼠呢,是不是应该用抗β-actin的抗体,如果抗体用的没错,建议你换个抗体试试,抗体效果好不好在很大程度上影响实验结果
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问
far western blot的marker跑出来只有一条条带怎么回事啊?
dxy_ql0su1t7
上样的样本是否经过反复冻融?是否有降解?可能需要新的样本来重复实验
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问
感受态细胞的转化,摇菌摇太久?
balalaLy
转化后摇菌是为了复苏感受态,一般摇40分钟左右,不过我做一般的转化是不摇的,直接涂板。摇太久会有杂菌或者减低转化效率
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问
PCR的对照组和空白组有什么区别?
申东熙老伯
对照分为阴性对照和阳性对照。空白对照是阴性对照的一种,指把样品换为水。阳性对照是指一定可以P出来的,结果可信的对照。
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问
关于PCR检测自动化问题
汤姆卜丽波
就是因为采样这个过程无法达到自动化呀,因为存在个体差异,全自动的话成本太高了
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问
这个是引物二聚体吗,cDNA,引物刚用过,pcr程序一样的,没问题,是什么操作还是其他原因导致的吗
bamboopiggy
不管是不是引物二聚体,这个数据不能用。你提的rna的质量如何?还有你反转的cDNA是第一次用么?如果是第一次用可能是cDNA质量不好。
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问
慢病毒转染和腺病毒转染有什么区别?
哎呀呀呀呀哎
1.慢病毒需要vector+包装系统2.adv包装病毒基因组游离于宿主基因组,瞬时表达慢病毒基因组可以整合到宿主基因组上,可长时间稳定表达外源gene3.慢病毒高免疫原性,腺病毒低免疫原性
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问
蛋白免疫印迹实验目标蛋白和说明书上的分子量差异很大怎么办?
dxy_ql0su1t7
可能有多个转录本,如果多次跑出来的都是一个分子量的话建议按照实际操作出来的分子量为准
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问
小鼠肺组织蛋白提取?
bamboopiggy
不锈钢珠是提蛋白的,氧化锆珠是提rna的,一般是1ml,加一大两小3个珠子。
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问
蛋白表达
bamboopiggy
你有没有跟beads结合以后的?上清中有,并不代表bind下来的就多啊。你先看看beads能binding下来多少
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问
我的PCR内参有CT值,目的基因测不出CT值,请问是什么原因(有图)
Topmicro
你查到的是对的,重新设定一下阈值看看,就是将选取的荧光强度调高。
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问
转染实验开始前,需要对转染试剂本身对细胞活性的影响进行检测吗?
bamboopiggy
如果第一次用,还是检测一下比较好,否则正式开始实验了,如果有问题,就会措手不及。虽然一般转染试剂的毒性都不是太高。
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问
请问大佬,我做自噬相关的通路
bamboopiggy
你敲除A,自噬升高,说明A是抑制自噬的,你加入自噬抑制剂,如果在A的上游,那可能A有改变,否则不会有改变
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问
特异性基因敲除鼠鉴定问题
bamboopiggy
你cd4上的特异性敲除,用鼠尾是鉴定不出来的(只能鉴定出是f/f,还是f/+,没法鉴定是否敲除了),你最好直接拿你跑wb的组化,取一部分进行鉴定。
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问
求助 | 大鼠灌注的时候灌pbs的时候流速先快后慢,对结果有啥影响,是哪里出问题了呢
bamboopiggy
可能是哪里堵了,如果pbs灌注不充分,会有血液残留,影响将来的组化结果。
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问
药物浓度越高,OD值越高
Topmicro
cck8实验一般不需要清洗,考虑一下你用的药物会不会对CT值造成影响,做不放细胞只放梯度药物的孔试一下。
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问
利用CRISPR进行基因敲除能不能敲除第一个外显子即ATG所在的外显子
bamboopiggy
这个技术上是可以敲掉的,但是一般进行基因敲除会从二号外显子开始进行。
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问
各位大佬,如果大肠在一个培养箱培养,会不会交叉感染?为什么食品粉碎机和手部大肠会来回感染?怎样清理干净?
dxy_n4jex0k8
培养的时候可以用封口膜封好,培养结束后用酒精擦拭一下,用完的器具和台面可以高温灭菌和照紫外30min以上。
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