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WB跑胶
此用户已注销
我觉得最主要的原因是蛋白样品在制样时,煮沸时间不够,没有充分被SDS包被,变性不充分。2.样品有降解3.上样量太大,分不开4.有时候,如果蛋白含二硫键的话,还原剂量不足,可能会导致蛋白在跑胶过程中的动态成键,也可能形成拖尾
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问
为什么冷冻切片切肌肉组织,切出来组织会碎?
汤姆卜丽波
有可能是取组织的时候,操作问题,也有可能是你操作时间太长
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问
293细胞状态不好怎么办?
汤姆卜丽波
这不正常,太长了,我觉得这是有点老化了
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问
冰冻切片时组织如何用蔗糖脱水处理?
此用户已注销
取新鲜组织于4%多聚甲醛固定24小时2 30%蔗糖脱水48小时以上3 -250C包埋(冰冻切片机内)4 冰冻切片冰冻切片步骤1. 冰冻切片4um左右,室温25°C复温30min,浸入4°C预冷的丙酮固定10min,2. PBS(PH为7.2-7.4)在9cm皿内摇床冲洗3次,每次5min(第一次冲洗时间短些,约1min后更换)
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问
双荧光素酶报告基因实验为什么萤火虫荧光素酶能比海肾素荧光素酶低吗发光信号?
土井挞克树
加量以及荧光保存是否有差别,避光了吗。
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问
Ser-Glu怎么合成?
Dr_劉医生
一般用化学方法或者酶法合成,具体步骤很多,可以参考这篇文章:“Dai T, Li N, Zhang L, Zhang Y, Liu Q. A new target ligand Ser-Glu for PEPT1-overexpressing cancer imaging. Int J Nanomedicine. 2016;11:203-212. Published 2016 Jan 11. do
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问
请问DNA实验中的内参基因可以用于RNA实验中吗
汤姆卜丽波
就是指gapdh这些么?可以的
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问
小鼠新鲜脾脏制备单细胞悬液具体步骤?
Dr_劉医生
不用加淋巴细胞分离液,用裂解液就行,一般就是胶原酶;另外,多个组织样本应该分开处理,细胞要保证活性的话,建议-80℃保存,后期复苏还可以用
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问
Walker 256细胞如何培养
此用户已注销
细胞状态不好 1.换液 2.贴壁细胞的话,消化下来,重新养 3.血清太少的话可以再加点
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问
提取小鼠脾脏组织蛋白。
yanlai000
低效率:液氮研磨,研钵加液氮研成粉末中效率:剪碎后冰上用手动研磨器研磨高效率:全自动研磨器,1.5ml EP管加2mm氧化锆研磨珠2-4颗研磨
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问
网状meta次要结局的不良反应分析急死了卡在一步了?
Dr_劉医生
这是明确outcome定义的问题,建议用消化道反应:包括恶心、呕吐等,在method部分和基线特征表格着重说明,当然也可以在基线特征中分一个亚组,1. 恶心;2. 呕吐;3.其他消化道症状,反酸等。
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问
蛋白跑出两条带后,统计以哪条为主
bamboopiggy
你别只看条带哪个亮,你要看哪个条带能反应出你实验的差异。就用哪个
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问
提取鼠尾腱胶原蛋白,使用4M的氯化钠进行盐析,一直没有蛋白质析出是什么原因?酸溶过程中出现凝胶状态
土井挞克树
水浴的稳定状态有利于析出蛋白质。
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问
C57小鼠和昆明小鼠哪个实验比较好呢?
Dr_劉医生
还是建议用C57BL的品系,尤其在你后续可能要做基因动物的时候,毕竟是Jackson实验室。基因差异主要在于一些对比公共数据库编码序列的差异:pde6bcds区(nm_ 008806)相比较存在如下不同;昆明小鼠706位碱基为a,而数据库中序列nm_ 008806第1149位碱基前后者为c。
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问
Popgene分析数据时出现out of memory,请问有人知道怎么解决吗?
zhc138
使用nvidia-smi会发现有程序占用大量显卡资源
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问
L-O2形态正常吗?
bamboopiggy
现在公认的这个细胞被Hela细胞污染了,你如果刚开始做建议放弃这个细胞,并且这个细胞应该是成片长的,感觉你的细胞周边有点缩。
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问
半干转转不过marker在胶上
yanlai000
半干转并不是完全干转,电泳液合不合适,胶和膜有没有干,电压/电流是否合适,时间是否太短,一项一项排查
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问
WB实验所有蛋白要跑在一张膜嘛?
土井挞克树
你可以跑在一张上,但是你的蛋白跑在一张上不好区分,建议分开跑。
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问
细胞实验求解答
疯狂管道工
可以 就是时间比较长 慢慢来吧 加油!
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问
实验小白,请问石蜡切片做免疫组化需要稀释tritonx100透膜吗?
bamboopiggy
你都把细胞切开了,就不需要透膜了
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