实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问求求大神帮忙解决贴膜法测量抗菌材料的抗菌性为什么连对照组也一个菌落没培养出来

高山云初

首先，要确认下是不是样品的问题，某些检测样品经过高温杀菌之后，本身就没有太多菌，所以没有菌落也是正常的。其次，过程操作有没有问题，比如用于检测的稀释液使用时是不是温度太高，或者倒培养基时培养基温度过高，亦或者培养基质量问题、培养箱温度偏低等。最后，检测时选择的稀释度过高，也可能导致没有菌落生长。总之出现这种情况需要从各个方面进行分析。其实首先就应该确认样品本身，很多检测样品检测平板不长菌落也是正常

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问想问一下大家，审稿人说的这个是啥意思，怎么改呢？

huarenqiang5

ors的范围过小，导致差异不明显。

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问小分子蛋白（10KD）WB实验电泳液中不加SDS是可行的吗?如果不加SDS，那电泳液的配方是？

huarenqiang5

小分子蛋白电泳液中不需要加SDS。

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问请教各位大佬们，小鼠的视网膜提取RNA浓度一般为多少？

sswei

视网膜算一个样本提取RNA后，提取的浓度一般为350±100ng/ul

3 回答1201 围观

问玉米抗氧化酶活性测定：样品研磨后加入缓冲液离心提取上清液，离心的过程中，温度升高到了45度，请问一下还能否继续做实验，酶活性如何

sswei

温度过高,酶的空间结构就会发生改变,从而使酶活性降低甚至失去活性;但低温只能使酶活性降低,而不能使酶失去活性,随着温度的升高,酶的活性可逐渐恢复。温度升高到了45度,玉米抗氧化酶活性渐渐恢复

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问请问有没有特定类型银屑病小鼠造模的方法？比如脓疱型银屑病，红皮银屑病等？

sswei

目前，银屑病小鼠模型主要采用两种方法建立：一种是基因敲除或突变法，例如K14- IL-4 transgenic mice和K14-TNF-α transgenic mice等；另一种是利用物理或化学刺激法诱导发生银屑病样皮炎，例如IMQ、DNFB、PGA和IL-23等。

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问有无大佬帮忙看看，这种碎碎的，是细胞污染吗？

周末也要努力呀

不是。区分是不是污染，一看会不会动，二看培养基浑浊度，都没有就不是污染

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问戊巴比妥钠用0.45um的过滤器过滤可以吗，给兔子静脉注射用的

sswei

给兔子静脉注射用的戊巴比妥钠用0.45um的过滤器过滤可以

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问请问WB时出现这种单泳道背景特别黑是什么原因呀？图1。其他的条带是整个背景都很黑，用5%牛奶，5%BSA，和10%牛奶都试过了

周末也要努力呀

增加封闭时间和洗涤次数。也可能是抗体不行了，重新配置。还有配牛奶的时候提前配置摇匀冰箱里放一会再封闭

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问请问有做单细胞PCR的大佬吗？我逆转录为cDNA后，设计引物PCR抗体重轻链，但P不出来，拖尾弥散

土井挞克树

考虑是样品内存在降解所以才会拖尾这么严重

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问组织铺片免疫荧光，鬼笔环肽染factin，只有中间一部分染上了，请教大家讨论一下什么原因呢？

RYX艳艳

第一有可能是玻片材质问题的影响。第二也有可能自身操作不规范染色过程中漏掉了某个环节。第三有可能是组织自身抗原表达问题

4 回答768 围观

问mcao小鼠造模，体重在25-30g，连着三只都感觉有阻力了，用的北京西浓的线栓，可是都没有梗，请问怎么根据体重算插入深度啊

sswei

插入深度约在2cm附近,至略有阻力为标准

4 回答666 围观

问【求助】为什么我cck8之前的孔都是细菌污染，是加样问题还是揭盖检测时空气沉降进去的

江朵朵_

如果试剂都没有问题，注意加样的时候手要拿东西不要从开盖的孔板上方经过，或者非要经过就要盖好盖子先，工作台做实验前要用酒精棉球擦桌子，手部不要戴手表手环手链之类的物品

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问噬菌体文库构建和淘筛需要单独的实验室吗，需要哪些仪器设备？

土井挞克树

冰箱，pcr相关设备，离心机，还有超净工作台等

3 回答412 围观

问Hprt1的ct值大约多少啊？

huarenqiang5

hprt1的ct值一般在20左右都可以。

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问冰冻切片SA-β-gal和核固红染色，用水性封片剂封片拍照发现组织表面覆盖一层杂质，什么原因如何避免

RYX艳艳

做冰冻切片免疫组化染色前要用PBS冲洗几次，要保持玻片的干净无污染。

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问质粒大提前摇菌的紫外吸光度多少合适

巴啦啦能量-wy

我一般都是吸光度测到了0.5且摇菌时间达到12h就提

4 回答437 围观

问H9C2细胞的 Myh7、ANP、DKK2基因RT PCR的引物序列？

周末也要努力呀

1. Myh7（肌球蛋白重链7）： - 前向引物：5'-ATGAGCGAGGAGGAGGAGGA-3' - 反向引物：5'-TTAGAGGTCAGTGGTGGTG-3'2. ANP（心房钠尿肽）： - 前向引物：5'-ATGGCTGCTCTCTGCTCTG-3' - 反向引物：5'-TTAGAGGTCAGTGGTGGTG-3'3. DKK2（Dickkopf 2）： - 前向引

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问友友们，想预测一下趋化因子CCL20的信号通路，用KEGG或者GO应该怎么操作？实验步骤是什么？

周末也要努力呀

1. 访问KEGG数据库（https://www.genome.jp/kegg/）或GO数据库（http://geneontology.org/）。2. 在搜索栏中输入CCL20或其它相关的关键词，如"chemokine CCL20"。3. 在搜索结果中找到与CCL20相关的通路或功能注释信息。4. 进一步分析相关通路或功能注释信息，了解CCL20在特定信号通路中的作用和调控机制。

3 回答536 围观

问C57来源的BMDC做抗原提呈实验，请问该怎么做？

周末也要努力呀

1. 骨髓细胞培养：从C57小鼠的骨髓中收集细胞，并将其培养在含有GM-CSF和IL-4的培养基中，以促进骨髓细胞分化为BMDC。2. 培养BMDC：将骨髓细胞在培养皿中培养7-10天，每隔2-3天更换新的培养基。3. 收集BMDC：收集培养皿中的BMDC，可以通过轻轻洗涤的方式将非附着的细胞收集起来。4. 处理抗原：将需要研究的抗原（如蛋白质、多肽或细胞裂解物）加入到BMDC的培养基中，使其与B

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