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问
PEI转染试剂有沉淀了还能用吗?
秋秋欣欣
融化了之后吹打一下沉淀会溶解吗,如果还是不行的话建议还是不要继续使用了
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问
poct机的肌钙蛋白测试卡片,用的是啥方法?干化学法吗?
土井挞克树
是的,poct机的肌钙蛋白测试卡片,用的是干化学法技术
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问
流式中检测细胞实验过程中,怎么确定你所检测的组织上是否表达该抗原?
huarenqiang5
1.用6孔板培养细胞,待细胞生长达到60%-70%,弃掉旧培养基。收集对应细胞培养基到一离心管内备用。2.用0.25%胰酶消化细胞,至细胞变圆,加入前面收集的细胞培养基,吹打下所有的贴壁细胞,并轻轻吹散细胞,收集到离心管内(注意:悬浮细胞不需要胰酶消化,直接收集到离心管即可)。3.200g离心5min,沉淀细胞。对于特定的细胞,如果细胞沉淀不充分,可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。4.小心吸去
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问
wb收细胞有什么好用的方法吗?
huarenqiang5
可以少加RIPA,或者把贴臂细胞消化下来后取细胞沉淀再加裂解液,看能否提高浓度,能杂出条带就有希望,每次都做内参,同一张膜做。
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问
组织芯片出现脱片,是因为脱蜡不完全吗
土井挞克树
和脱蜡有一定关系,可以在做芯片前先将蜡块切片贴在防脱胶载玻片上,再进行操作
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问
蔗糖氯化钙溶液的作用? 还有具体怎么做呢
huarenqiang5
有生理性堵塞、促进吸水、抑制微生物的作用,有旋光性,但无变旋光作用。
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问
f系列proof一般多久收到
huarenqiang5
这种情况肯定有问题了,proof不会要1个月,一般一周就可以了,建议联系咨询
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问
凝血酶切除GST标签
huarenqiang5
柱上酶切是推荐的方法,因为许多潜在的杂质都能被洗掉,目的蛋白洗脱时具有更高的纯度。如果直接用混合液去做实验的话可能会导致GST融合蛋白不能被有效地洗脱下来、洗脱出的蛋白不纯等等
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问
请问细菌基因组三代测序提DNA有什么注意的点吗?
huarenqiang5
离心柱漂洗完成后,尽可能烘干柱膜上残留乙醇,残留乙醇会影响洗脱效率和下游实验效果;如果A260/230值过低,说明样本提取过程中,漂洗不彻底,有盐离子残留,建议增加漂洗次数; 对于基因组DNA提取,A260/280值如果低于1.7说明有可能存在蛋白污染,如果值大于1.9,说明可能存在RNA污染;如果洗脱样本时没有使用BufferEB,而使用ddH20,比值或偏低,因为P
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问
实验技术
huarenqiang5
可以用沉淀法、EDTA鳌合滴定法、火焰光度法(flamephotometry) 原子吸收分光光度法等
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问
做Western Blot时,同样的抗体免疫组化能做出,而Western Blot却不能?
balalaLy
要看这个抗体能不能做wb,就算能做,如果表达量很低也是比较难做出来。其次是你这个蛋白如果是核表达的话可能会因为裂解不充分导致蛋白提取失败或者提取量低。
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问
要做磷酸化某因子WB,其二抗有何要求?
balalaLy
二抗没有特殊,关键是一抗要选择对,得能识别磷酸化的
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问
大分子量蛋白200KD或以上,在做WB要注意什么呢?
c_Yeats
1.试试4-20%的梯度胶电泳2.电转过程优化方案,湿转恒流200mA 2.5H,0.45um PVDF膜,一定要多加冰袋制冷。3.可以在Western转膜液加0.1% SDS
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问
流式测凋亡上机测试前的清洗,注意点是什么
汤姆卜丽波
用PBS洗2次,1000r/min离心5min,收集沉淀。休息要尽量弃净上清,可以用枪头吸出去,然后用4℃预冷的70%的冰乙醇1ml重悬,4℃过夜。
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问
请问DAB好还是ECM好?
汤姆卜丽波
如果你的实验条件可以的话,那首选ECM,正常实验来看,灵敏度是够的
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问
流式细胞仪上的FL2-W FL2-A FL2-H 分别是做什么的?
elabscience
理想状态下,细胞是一个一个通过流式细胞仪激光照射区的。细胞通过激光照射区所产生的荧光信号被PMT接收,转化成电脉冲信号,如图所示:从细胞进入激光照射区到离开,电脉冲信号由0到达峰值,再降回0,被记录为一个峰值。H是脉冲高度,代表脉冲信号的峰值,W是脉冲宽度,是指细胞通过激光照射区域的时间,A是脉冲信号的面积。
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问
小片段DNA50-60bp左右,用酶切法构建质粒,有什么缺点?比如酶切,回收,纯化有什么限制,相较于300bp以上的来说?
汤姆卜丽波
小片段限制很多,首先酶切不均匀就不好切,还有就是片段小跑胶不容易跑出来,回收也很容易漏掉,建议你在片段左右两边添加一些序列
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问
色差仪连接电脑时,显示外部软件发生损坏是为什么啊?是坏了吗?能解决吗?
汤姆卜丽波
应该是连接电脑和色差仪的那个软件出了问题,你把它卸载了,让工程师再装一遍
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问
请问用thermo的仙台病毒将PBMC进行ips重编程出不来怎么办?
c_Yeats
1.问问技术支持,优化掌握下操作相关的技术要点。2.在PBMC细胞基础上做相关的富集CD34+细胞3.换成皮肤成纤维细胞等其他体细胞试试看
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问
磁珠分选和流式细胞仪分选的结果有什么不同,侧重点是哪里?
elabscience
流式分选可同时针对多个指标进行分选,分选速度快、纯度高,但相较于磁珠分选,对细胞造成的损伤会更大;磁珠分选对细胞状态保护较好,但通常一次只能针对一个指标分选,且纯度也不如流式分选高。
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