大分子量蛋白200KD或以上，在做WB要注意什么呢？

1.试试4-20%的梯度胶电泳

2.电转过程优化方案，湿转恒流200mA 2.5H，0.45um PVDF膜，一定要多加冰袋制冷。

3.可以在Western转膜液加0.1% SDS

要用浓度低的分离胶，一般是7-8%

大分子蛋白建议超声处理(注意降温)，蛋白质溶解度会更好，离心要充分(12000转/min，10-15min)。

蛋白分子量大的话要注意跑胶时间可以长一点让它尽量跑清晰，然后就是转膜时间也相应长

需要注意转移时间相应延长(至少300mA，3h或以上)；必须要使用大量程的Marker。