实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问100KD左右的蛋白转膜230mA多长时间合适？用的8%的预制胶

申东熙老伯

转膜转90－120分钟比较合适。

4 回答2522 围观

问Elispot检测新鲜PBMC IFN-γ分泌，使用CD3及PHA均无斑点分泌。

土井挞克树

考虑体系内特异性产物有降解才会没有分泌斑点

2 回答929 围观

问网状meta分析求教学

Dr_劉医生

先把R的代码学会，其他就是找文献和数据分析了

3 回答474 围观

问EMSA

Dr_劉医生

EMSA肯定用试剂盒便宜些呀，3‘和5’都有，根据你探针来定，可以去NCBI查查

3 回答612 围观

问想要检测血液标本里面的HSP90以及氧化应激指标的表达

Dr_劉医生

只要样本量够，就会选择elisa来测量呀，直接购买相应试剂盒，高效便捷，结果也精准。PCR只适合量很小的去用，而且效率和容错率不行

2 回答627 围观

问再也养不出这么好的神经干细胞了

bamboopiggy

神经干一般能传3-5代，所以只能不断的自己提，千万别去公司买，买的，售后态度巨差

3 回答453 围观

问求助hepaRG怎么培养啊？

bamboopiggy

在正常培养液的基础上，加入1%DMSO或者2%DMSO即可，意思是将DMSO加入培养基，使其终浓度为1%或2%，换液确实是2-3天换一次

3 回答1288 围观

问病理切片图片处理

loveliufudan

常用的软件包括：ImageJ: 一款开源的图像处理软件，适用于病理切片的分析和标注。Aperio ImageScope: 一款专门用于病理切片图像处理和分析的软件。QUPath: 一款用于计算机辅助病理切片分析的开源软件。Arivis Vision4D: 一款用于三维病理切片图像分析的软件。这些软件的选择取决于用户的实际需求和技能水平。

3 回答1673 围观

问微生物学发文章系统发育树请问用原图还是consensus图！急求

Dr_劉医生

1、投稿用consensus图就可以了；2、二者不一致的情况是软件的问题，但趋势都是一样的，不影响结果。

3 回答409 围观

问Meta分析

loveliufudan

当然可以，如果你的论文尚未发表，你当然可以写一篇英文版本。但是，重要的是要检查是否对原始论文存在版权或知识产权限制。此外，最好检查一下你的大学或潜在出版物的出版指南，以了解他们是否对以前发布的作品有任何特定要求。

3 回答118 围观

问细胞培养添加剂B27不能反复冻融，要如何分装保存？

loveliufudan

一般情况下，可以将 B27 细胞培养添加剂分装到冰箱里（2-8℃）保存，可以保存 2-3 个月。但是建议不要反复冻融，以保证 B27 的活性不受影响。使用前需要充分振荡后才能加入培养基中。

3 回答811 围观

问小鼠肝脏HE染色的病理学分析

bamboopiggy

没看出来有纤维化的样子，你可以考虑网状纤维和(或)Masson三色染色，来看纤维化

2 回答2895 围观

问制备组织匀浆

balalaLy

这要看你的实验目的是什么。如果是提蛋白一般用专门的裂解液，如果是用于检测酶活性或者其它一些成分，要根据后续实验所用试剂的要求，有些检测试剂盒可能pbs或生理盐水都可以，有些会有要求不能含有某些成分。

3 回答1031 围观

问同一种细胞，有的时候CCK8染色2h就可以了，有的时候需要一个晚上。

bamboopiggy

cck8一般作用时间是1-4个小时，过夜是没法用的。这个是细胞活力检测的试剂，其颜色的深浅，取决于细胞数目的多少

3 回答2086 围观

问信号通路蛋白和基因处理时间不一致

loveliufudan

有关信号通路基因处理时间和蛋白质处理时间的差别，可能是因为信号通路调控的机制不同。基因处理的时间是指在体内基因发挥功能的时间，而蛋白质处理时间是指从刺激发生到蛋白质表达反应的时间。因此，信号通路的基因处理时间可能需要数小时，而蛋白质反应的处理时间可能只需要数分钟。在某些情况下，短时间内观察蛋白质反应可能更能反映基因处理对信号通路的影响。但是，这并不代表所有情况都如此，具体情况还需要根据研究的特定目

3 回答319 围观

问慢病毒qPCR检测没有敲低

bamboopiggy

多设计几个靶点，可能你设计的靶点不好。

3 回答695 围观

问B16F10细胞状态差怎么调整? 不知道什么原因细胞上总是有泡泡

loveliufudan

这种泡泡可能是细胞膜泡，它的形成是由于细胞膜的损伤导致的。细胞膜的损伤可能是由于一系列因素造成的，例如：消化时间过长、细胞过于密集、细胞被过度损伤、细胞老化、细胞生理活动异常等。避免这种情况，可以采取一些措施，例如调整细胞密度，调整培养条件等。

3 回答884 围观

问AKT/m TOR通路

bamboopiggy

磷酸化的和total的mTOR都要做，其中磷酸化的是mTOR的活化形式，total是总的mTOR

3 回答515 围观

问免疫细胞表面蛋白

dxy_uv8jfkbw

我们实验室从外周单核细胞培养mDCimDC一般在培养D4后表达HLA-DR+、CD86mDC表达HLA-DR+、CD80、CD83、CD86

3 回答496 围观

问做ELISA实验，三遍，复孔之间重复性差异很大是什么原因呢？

dxy_r9ji8ui4

差异大是多大？一般要求不能超过15%，竞争法有时20%也能接受还有不要压着标曲的检测下限去测量，尽量高中低三档同时观察，非压着检测限的值去测，肯定容易重复性差标曲一定要做好，r2＞0.99以后再谈别的，要看计算后的浓度值，不能看OD读值。每次实验标曲必做。标曲拟合方程尽量用4pl，拟合度更好

8 回答3612 围观

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