实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问骨髓间充质干细胞培养

huarenqiang5

无需程序冻存，细胞可直接置于- 80°C冰箱完成冻存过程；无血清无蛋白配方，成分明确，不影响细胞的生长和分化潜能及其它高级应用；冻存步骤[1]1. 选择处于对数生长期的细胞，按照常用的方法收集细胞于离心管中，按照培养细胞密度和所用细胞冻存管的尺寸计算所需冻存细胞数（参考数量：5×105 至 5×106cells/mL）。2. 取相当于所需细胞数的细胞悬浮液量，置于离心管中，离心收集培养细胞（考离心

3 回答456 围观

问各位大神，我做的肠道TLR4-NFkB,用WB测肠道总p65下降，是否可以说明通路被抑制了，还是必须测磷酸化NFkB

loveliufudan

肠道TLR4-NFkB通路的激活可以通过NFkB信号转导通路进行，而p65是NFkB家族的一个成员，因此在一定程度上可以反映该通路的活性。p65在未被磷酸化时会停留在细胞质中，而当受到特定信号激活时会被磷酸化而迁移进入细胞核并激活下游基因的转录。因此，p65的下降可以暗示该通路被抑制了，但并不能说明抑制是由于磷酸化的改变，还是由于其他机制的调控，例如通过核转运的改变。如果你想更全面地了解该通路的活

4 回答641 围观

问如何做mRNA变性胶

土井挞克树

变性聚丙烯酰胺凝胶，是分子生物学常用技术之一，凝胶的灌制比水平电泳槽凝胶灌制困难，漏胶和产生气泡常在所难免，需经过反复实践才能掌握其灌制技巧。

4 回答378 围观

问在current vascular pharmacology上投了一篇文章最终的内容审核要多久

土井挞克树

一般一个月左右，过了一个月可以询问编辑

4 回答2877 围观

问pcr两条引物同时在一条链上会怎样？（两个都是正向引物）

huarenqiang5

这样一般是引物序列设计不合理，然而就可以导致位于5'端的引物合成到3'端的引物后无法继续进行，但是3'端的引物可以一直复制到3'末端。

4 回答3656 围观

问想说明某因子促进病毒复制从而致瘤有关研究，转染和接毒顺序是啥样？

土井挞克树

在病毒感染的前提下做过转染成功率高

4 回答282 围观

问lip3000脂质体转染问题？

土井挞克树

建议先加到无血清培养基再转染，成功率高

4 回答1366 围观

问为什么要热灭活血清？

土井挞克树

热灭活目的是为了去除血清中补体等对热敏感的物质

5 回答1121 围观

问细胞内的蛋白如果暂时没有时间提取，可以先把细胞离心取沉淀然后冻起来，等有时间再提吗？

loveliufudan

是的，将细胞离心取沉淀并在冷冻保存之后，可以在以后的时间点进行蛋白质提取。事实上，这是一种常用的技术，在许多实验室中被广泛使用。当细胞被冻结时，其代谢活动会停止，因此细胞内的蛋白质也会停止活动并保持在原位。然而，应该注意到，蛋白质可能会发生不可逆的变性和降解。因此，在冻结细胞前，最好根据需要的蛋白质提取方法对样品进行预处理，并使用适当的缓冲液和保护剂以保护蛋白质。在提取蛋白质之前，需要将冷冻的细胞

4 回答4149 围观

问MDBK细胞需要用什么培养基培养，血清比例是多少？是贴壁细胞吗，需要胰酶消化吗？

土井挞克树

细胞特性　　1）来源：牛肾正常细胞　　2）形态：上皮细胞样，贴壁生长　　3）含量：>1x106细胞数　　4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装　　5)用途：仅供科研使用。培养基及培养冻存条件准备：　　准备1640培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。　　2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。　　3）冻存液：90%血清，10%DMS

4 回答1012 围观

问细胞在荧光显微镜下看不到是怎么回事？

土井挞克树

设置的波长可能不对，重新设置波长或者调节荧光补偿

3 回答1342 围观

问载药颗粒释放速率测定

土井挞克树

用你的平均释放速度除时间就得到释放速率

3 回答4453 围观

问外泌体做蛋白质组学需要去高丰度蛋白吗？

loveliufudan

对于外泌体样本进行蛋白质组学分析时，通常也需要去除高丰度蛋白。外泌体是一种细胞分泌的小囊泡，内含大量不同种类的蛋白质，其中某些蛋白质可能具有极高的丰度，这些高丰度蛋白可能会掩盖住外泌体中其它低丰度蛋白质的信号，影响蛋白质组学分析的准确性和可靠性。一般采用不同的富集方法去除外泌体中的高丰度蛋白，常用的方法包括尺寸排除层析、电泳、超速离心等。这些方法都是通过物理化学性质差异选择性地富集外泌体，同时剔除

4 回答812 围观

问血浆、血清样本做基于质谱的蛋白质组学为什么要去除高丰度蛋白?

loveliufudan

血浆和血清中的蛋白质种类繁多，其中大部分蛋白质都是极低丰度的，而极少数的蛋白质却具有高丰度。这些高丰度蛋白质可以占据大量的质谱信号，使得低丰度蛋白质的检测变得困难，甚至无法检测到。因此，在进行基于质谱的蛋白质组学分析时，需要去除高丰度蛋白质，以便更好地检测低丰度蛋白质。去除高丰度蛋白质的方法有多种，其中最常用的是亲和层析法和尺寸排除层析法。亲和层析法基于高丰度蛋白质和其它蛋白质之间的亲和性选择性地

4 回答1961 围观

问蛋白质组学或代谢组学分批检测，数据能再整合到一起分析吗？

loveliufudan

对于蛋白质组学或代谢组学分批检测的数据，可以通过不同的方式进行整合，以便进行综合分析。一种常见的整合方法是批次效应校正。由于蛋白质组学或代谢组学分批检测时可能受到不同实验条件或实验者的影响，因此批次效应校正可以帮助消除这些影响，提高数据的可靠性。通常，批次效应校正可以通过一些统计学方法实现，如正则化、标准化或应用混合模型等。另一种整合方法是采用多元统计学技术，如主成分分析（PCA）、偏最小二乘回归

4 回答637 围观

问有关连续性变量危险因素的meta分析

陈大文618

首先，对于连续性变量作为危险因素的meta分析，研究通常使用非条件logistic回归模型得出OR值和其95%CI值，这些值表示了连续变量与二分类变量之间的关系。例如，假设您研究的是CRP值（一个连续变量）与心脏病（一个二分类变量）之间的关系。通过单因素分析，您可能会发现高CRP值与心脏病之间存在统计学显著性。在进行多因素回归分析后，您得到的OR值表示在控制其他因素的情况下，每增加一个CRP单位，

3 回答810 围观

问急问！！三组独立样本但有两个重复，是用两两t检验还是单因素方差分析？

loveliufudan

对于您提到的这种情况，建议使用单因素方差分析来分析这三组数据，而不是多次进行两两 t 检验。单因素方差分析可以比较三组或以上的样本均值是否显著不同，同时还可以检验不同组别之间的交互作用，比如模型组与治疗组的交互作用。在您的情况下，对照组与模型组之间的比较可以作为交互作用的一部分考虑，因为模型组与治疗组的差异可能取决于对照组的胆固醇水平。非参数检验也可以用于这种情况， Mann-Whitney U

4 回答540 围观

问nhanes数据库摄入量怎么计算

陈大文618

1。查找NHANES数据库中的摄入量数据，这通常涉及到下载可用的数据集并使用相关的软件来访问它。有些常用的软件包括SAS、SPSS、Stata等，这些软件都提供了对NHANES数据库的支持。2。阅读相关文档以了解数据集中使用的测量单位。NHANES数据库中的摄入量通常以克（g）为单位给出，但也可能以其他单位（如卡路里）给出。3。使用正确的统计方法计算摄入量。NHANES数据库提供了一些有用的变量和

3 回答3692 围观

问请问大家transwell这个背景怎么消除呢

huarenqiang5

预处理好的细胞用胰酶进行消化（一般用6孔板进行前期的一个转染、加药等预处理操作），用PBS重悬清洗细胞，避免血清的干扰，使细胞处于一个无血清的环境。

3 回答1104 围观

问求助如何测量大鼠颏舌肌肌电

huarenqiang5

用BL-420E+生物机能实验系统对SD大鼠颏舌肌进行肌电检测，检测指标为：动作电位、平均频率、最大频率、积分幅度、最大幅值。

2 回答658 围观

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