实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问插入序列与egfp之间序列有很多碱基会引起突变吗

juyue2010

可能会，最好是将中间序列去掉，仅保留少量碱基，

3 回答521 围观

问免疫层析的那些示意图是用什么画的呀，我现在想画个免疫层析的试纸条，找不到合适的软件

土井挞克树

可以用image软件进行绘制示意图。

2 回答428 围观

问想请教一下，对免疫荧光的数据处理是只能处理单通道的荧光强度吗？Merge 之后的图像只是用于直接观察吗？[皱眉R][皱眉R]

huarenqiang5

是的，免疫荧光数据处理必须将2个通道的荧光分割开，获得2张图像。从而处理单通道的荧光强度。如果是多色荧光标记就是多了通道而已，分割方法也是一样的。

3 回答141 围观

问请问细胞免疫荧光可以用冻存再恢复的细胞嘛，以及细胞固定后可以冻存嘛？

huarenqiang5

免疫荧光可以用冻存再恢复的细胞。

4 回答643 围观

问投稿要求整张膜，如果二抗种属不一样，可以一起混合孵育吗？

huarenqiang5

二抗种属不一样不建议一起混合孵育。

3 回答122 围观

问进行倾向得分匹配纳入的变量数

loveliufudan

PS评分的构建可以采用多种方法，其中包括logistic回归等。在构建PS评分时，确保有足够的EPV是很重要的，因为EPV越高，对结果的置信度就越高。通常，建议至少每个分组（例如治疗组和对照组）需要有10个事件（例如死亡或复发）才能确保具有足够的EPV。因此，如果病例组和对照组分别有45和93个个体，那么病例组的EPV仅为4.5，而对照组的EPV为9.3。在这种情况下，最好不要使用所有的基线变量来

2 回答265 围观

问co-ip一般都选用哪种裂解液？课题组有RIPA（强），还有自己配的强、中、弱的裂解液，应该选哪种比较合适？

土井挞克树

一般首次使用应该选择中度的裂解液，避免过度裂解和裂解不充分

6 回答4421 围观

问pet28a质粒dna提取浓度低

土井挞克树

必须增加菌液量，目前来看就是上样量太少了，增加样本量

3 回答2505 围观

问3t3诱导：图1：诱导第六天，为什么细胞不变圆而是胖梭形？第一次诱导时间太短？图2:诱导第十天，这些白色小点是脂滴吗？也是梭形

土井挞克树

考虑是细胞内的梭形脂滴，延长第一次诱导时间看一下

4 回答391 围观

问co-ip时出现的IgG重链条带怎么解决

土井挞克树

换另外一种二抗的IgG，是非特异性结合

4 回答1896 围观

问southern blot搭桥容易倒，用什么装置比较好？

土井挞克树

可以用木架或者木板代替三折纸，会稳固很多

2 回答352 围观

问southern blot 检测HBV的DNA变化，RcDNA和nsDNA的条带怎么分析？是看rc还是ns？

土井挞克树

如果看的是dna变化的话，一般是看rc。

2 回答424 围观

问制备western blot分离胶后，使用无水乙醇还是纯水进行液封？两者有何不同吗？

土井挞克树

建议使用无水乙醇液封，无水乙醇对分离胶影响小

4 回答2262 围观

问免疫组化结果图很黄，几乎看不到蓝色

土井挞克树

先把ph检查一下，ph不合适就会染不上

3 回答1169 围观

问做免疫荧光经验求分享？

土井挞克树

如果核定位不好,建议封闭和打孔合为一步,即在封闭液中添加0.5% TRITON-100,37度封闭2小时,加一抗后最好4度孵育过夜(16小时)。

4 回答524 围观

问我对鱼的肠道染色，遇到苏木精的蓝色可以染上，0.5%伊红的红色完全染不上去，可能是哪步出了问题呢？

loveliufudan

对于鱼的肠道染色遇到苏木精的蓝色，但是无法染上0.5%伊红的红色，可能有以下几个原因：染色时间不够：染色时间不够可能会导致染色不均匀或者染色效果不佳，因此可以尝试延长染色时间。染色温度过低：温度过低可能会影响染色效果，因此可以尝试将温度调高一些。pH 值不合适：染色 pH 值不合适也会影响染色效果，因此可以尝试调整 pH 值。组织固定过度：固定过度可能会导致细胞膜破裂，染色剂不能进入细胞内部，从而

3 回答473 围观

问免疫电泳实验中，电泳条件已经优化，但仍然无法分辨出目标蛋白。我该如何提高分辨率和灵敏度？

土井挞克树

可以在电泳之前应用免疫沉淀法将抗原进行纯化

2 回答353 围观

问髓核干细胞sirna转染

huarenqiang5

可以借鉴一下这篇文章《骨髓间充质干细胞的转染》一、试验材料：1、LB液体造就基：称取蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，溶于800ml去离子水中，用NaOH调整PH到7.5，加去离子水定容至1L，高压灭菌20min.2、LB平板造就基：LB液体造就基中按1.5%的浓度参与琼脂，加热溶解，进行高压灭菌。取出后趁热在无菌条件下，倒入无菌的平皿中，每套平皿中参与12-15ml，

3 回答375 围观

问snail泛素化

dxy_xextz7w2

检测泛素化不是检测特定的条带，泛素化的范围广因此要检测整个蛋白泳道的

3 回答557 围观

问土壤微生物分离与纯化相关问题

loveliufudan

分离不同类型菌种的培养基应该根据所要分离的微生物的特性进行选择。一般来说，可以选择一些通用的培养基如TSA（Tryptic Soy Agar）、NA（Nutrient Agar）等，以及一些选择性培养基如MacConkey Agar、Sabouraud Agar等，这些培养基可以分离出不同类型的微生物，如革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、真菌等。另外，还可以选择一些特殊的培养基如土壤菌培养基、氮素菌培养

3 回答607 围观

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