实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问想知道免疫酶染色中的 3% 过氧化氢及 2N 盐酸是否还需要用？

loveliufudan

在免疫荧光实验中，过氧化氢和盐酸通常用于免疫酶染色的显色步骤。过氧化氢用于去除样本中的内源性过氧化氢，以避免假阳性结果。2N 盐酸则用于裂解细胞膜和细胞核，以释放酶底物和染色质，并使细胞内的目标抗原易于识别。但是，在进行免疫荧光实验时，由于您使用的是二抗 FITC 标记，而不是酶标记，因此不需要使用过氧化氢和盐酸进行显色步骤。因此，您可以不使用 3% 过氧化氢和 2N 盐酸。需要注意的是，即使您不

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问Wb显影结果很糊是什么原因啊？

土井挞克树

抗体特异性差的原因，造成了非特异性染色，建议更换特异性高的抗体

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问求助大鼠杏仁核取材方法

龙大人驾到

大鼠杏仁核取材需要先行动物体内注射麻醉剂，确保大鼠无痛苦，并进行以下步骤：1. 用生理盐水洗涤大鼠头部，以除去外表的污垢和细菌。2. 制备一支大鼠取材钳（也称为显微取材器），将其用70%乙醇消毒并放入PBS缓冲液中。3. 将大鼠固定在取材架上，使用手术刀在头部处进行切口，直至完全暴露出颅骨。4. 使用电动钻钻开颅骨，注意不要损伤杏仁核。然后，通过使用细长、平底的巴氏手术刀，切割硬脑膜，揭露出杏仁核

3 回答1981 围观

问wb跑胶的时候内槽的电泳液老是漏是怎么回事？

土井挞克树

漏液多是因为电泳槽老化密闭性差的缘故，建议更换电泳槽

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问做wb的时候，全膜可以一起孵育抗体吗，怎么稀释抗体？

土井挞克树

可以一起孵育抗体，在不同的区域，不会互相影响

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问关于硝酸银染色和钙离子浓度试剂盒

土井挞克树

染色前是否多次用蒸馏水清洗，如果没有清洗，染色很容易失败，还有就是暴露的时间不可以太长

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问为什么ip之后要跑胶做银染呢？

loveliufudan

在免疫沉淀（IP）实验中，我们使用抗体将目标蛋白质与其相互作用的其他蛋白质一起沉淀下来，然后通常需要对沉淀物进行分析以确定哪些蛋白质与目标蛋白质发生了相互作用。这个分析的方法通常包括Western Blotting（WB）和银染分析。银染和WB的最大区别在于它们使用的检测方法不同。WB主要通过特定的抗体来检测目标蛋白质及其相互作用的其他蛋白质。而银染则是通过银离子化学反应的方式，将沉淀下来的蛋白质

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问southern blot应该如何定量？

huarenqiang5

用含溴化乙锭的1%琼脂凝胶电泳法测定，根据加入标准品片断的电泳迁移距离计算样品片断分子量大小。

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问最近在做NCI-H716分泌GLP-1的实验请问基质胶稀释多少倍？

土井挞克树

以24孔板为例，做实验时每孔加入基质胶20-30ug（一般配成200-300ug/ml的工作浓度，然后每孔加入100ul即可）。此时，基质胶是100ul即可）。此时，基质胶是稀释到很低的倍数（有的实验需要低至30倍稀释，具体最适浓度需根据自己的实验进行优化）。铺胶后置于37℃提升箱放置1小时，取出后如果上层有液态提升基，需小心弃去上层的液态提升基即可使用（此时基质胶沉在底部形成一小薄层）。

4 回答749 围观

问THP-1诱导失败无数次，跪求高人指点？

土井挞克树

pma的终浓度一般在100ng/l。

4 回答567 围观

问不知道WB中这些斑块产生的原因和解决办法，求

Luckybabygirl

看起来特别像加样时样本飘了的痕迹，但出现在最终的条带上，可能是有气泡正好在那个位置，那就下次记得把气泡赶走。如果是第一次跑，可以在分析下上样量以及其他问题，多试试

5 回答302 围观

问免疫荧光实验，细胞很模糊，封片剂却明亮原因？

土井挞克树

还是抗体的问题，更换特异度高的抗体后再做。

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问c56小鼠做uuo死亡率高么？

sswei

即使经验丰富的老手操作，使用小鼠进行UUO法制备模型，死亡率也会很高。同时，小鼠组织太少，如果检测指标较多而动物数又不够，可能会出现组织量不足的情况。建议选大鼠。

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问怎么检测MDSC的免疫抑制作用？采用什么体外实验？

天一湖医者

1、MDSC+T细胞共培养，CFSE标记T细胞，流式检测T细胞增殖2、MDSC+激活后的T细胞共培养，ELISA检测培养上清中T细胞活化分泌IFN-γ的量

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问细胞里面有小的蓝色DAPI荧光，是细胞核碎了导致的吗？

huarenqiang5

主要考虑：第一，DAPI染料有没有问题；第二，切片有没有问题；第三，方法是否正确。

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问使用ChIP技术验证基因的转录调控

sswei

其原因：一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体.二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低,及PCR循环次数过多有关.其次是酶的质和量,往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶则不出现,酶量过多有时也会出现非特异性扩增.

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问小鼠大脑切片的免疫化学实验

sswei

包括阳性对照在内，全部呈阴性反应，原因可能是：①染色未严格按操作步骤进行；②漏加一种抗体，或抗体失效；③缓冲液内含叠氮化钠，抑制了酶的活性；④底物中所加H2O2量少或失效；⑤复染或脱水剂使用不当。

4 回答407 围观

问免疫沉淀实验中，如何判断抗体的亲和性和特异性，是否有其他实验可以用于确认结果？

sswei

抗体特异性验证的几种方法:1. 多抗体验证，2.基因敲除/敲降验证，3.天然差异对照验证，4.酶法检测验证

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问求助大家：PBMC可以诱导分化pDc吗，该如何做呢，请各位大神指教

龙大人驾到

PBMC可以诱导分化成pDC。以下是一种常用的方法：1. PBMC提取：从新鲜采集的人类全血中提取PBMC，方法包括梯度离心、红细胞淋巴细胞分离液等。2. 培养PBMC：将PBMC在含有GM-CSF和IL-4的培养基中培养5天以获得生长迅速的DC。3. 刺激分化：将培养的DC在缺乏血清的培养基中刺激24小时，通常使用CpG DNA进行刺激，也可使用病毒、细菌等免疫刺激物。4. 分化pDC：将刺激过

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问LPS诱导细胞炎症促进防御素表达

汤姆卜丽波

可以分析你的测序结果啊，看看不同浓度诱导的表达有什么差异

3 回答1244 围观

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