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问
CD4+T细胞rna提取浓度和纯度总是太低如何解决?
土井挞克树
更换提取方法,或者增加上样量。
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问
双荧光素酶实验裂解细胞前有必要用PBS清洗细胞吗?
土井挞克树
有必要,可以大部分清理掉污染和杂质的干扰
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问
T载体连接转化后挑选阳性菌落跑菌液PCR,然后送测序,测序结果与参考序列比,长度少了100bp左右,这是为啥呢?
土井挞克树
考虑体系内存在降解,可能是在pcr过程中断裂
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问
人和小鼠的中性粒细胞大多是Ly6G,CD11b/c,大鼠的中性粒细胞标志物,文献里很少有,也不统一,流式用什么标记比较好?
loveliufudan
人和小鼠的中性粒细胞表面标志物确实大多是Ly6G和CD116/C。对于大鼠中性粒细胞的表面标志物,虽然文献中不太统一,但是CD11b和Ly6G被广泛认为是大鼠中性粒细胞的标志物。对于流式细胞术的标记选择,通常建议使用多个标记共同检测目标细胞。对于人和小鼠中性粒细胞,常用的标记包括Ly6G、CD11b、CD15、CD16和CD66b等。对于大鼠中性粒细胞,常用的标记包括CD11b、Ly6G、CD45
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问
细胞片组织片固定的原理
天一湖医者
固定方法可以分为两类:有机溶剂和交联剂。有机溶剂如甲醇和丙酮等可去除类脂并使细胞脱水,同时将细胞结构蛋白沉淀。交联剂如多聚甲醛通常通过自由氨基酸基团形成分子间桥连,从而产生一种抗原相互连接的网络结构。交联剂比有机溶剂更易于保持细胞的结构,但因为交联阻碍抗体结合,可能会降低一些细胞组分的抗原性,因此需要增加一个通透步骤以使抗体能够进入标本。两种固定方法都可能使蛋白抗原变性,因此使用变性蛋白作为抗原生
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问
免疫荧光实验通透剂的选择及原理
天一湖医者
一般用 0.1%皂角苷戒 0.02%的Triton X-100 进行通透。
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问
细胞转染了带FLAG的质粒为什么看不到荧光?
天一湖医者
和你表达的蛋白有关系.如果转染后24h没有达到蛋白表达的峰值,或者呈比较低的表达量的话,做IF时可能会信号很低,有的甚至可能观察不到信号.
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问
请问完全培养基培养条件下,dc2.4细胞是可以不断增殖的吗?我感觉我的dc细胞长得和肿瘤一样快,不知道是不是被肿瘤细胞污染了
loveliufudan
DC2.4是一种小鼠树突状细胞(DC)系列,该细胞系来源于小鼠的转基因肿瘤,可以通过不断培养来保持细胞增殖。然而,这种细胞系的增殖速度比其他小鼠DC系列要快,可能会让人误认为被肿瘤细胞污染了。因此,需要通过一些特定的标志物和功能特征来鉴定DC2.4细胞是否具有树突状细胞的特征,例如:CD11c、CD80、CD86等分子的表达、分泌IL-12和IL-10等免疫调节因子。此外,在进行细胞培养时,需要注
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问
免疫组化中,标本的着色位置不对一般是什么原因造成的?
huarenqiang5
可能原因为:1.固定原因;2.修复过度;3.抗体质量原因;4.一抗浓度过高或实验温度过高、时间过长。
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问
内源性过氧化物酶的灭活时间和浓度是什么?
土井挞克树
一般灭活需要10min,重复三次。
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问
免疫组化大家一般实验组纳入多少病例数?
huarenqiang5
免疫组化实验组至少4-6病例数。
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问
求问如何明确目的蛋白的哪个功能结构域起作用?
土井挞克树
可以做肽链分解或者肽链合成来验证
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问
细胞铺96孔板,隔天换基础培养基,换完后个别孔里的细胞中间状态就不一样了,请问是什么原因呀?中间这种细胞后面加MTT染色就
土井挞克树
考虑是加入的浓度不合适,对细胞产生了分选,可以稀释后加入
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问
请问有没有大佬有新物体识别的好方法,我的一批正常小鼠对新物体并不是特别感兴趣,甚至更喜欢旧物体?
土井挞克树
尽量保证环境不变只变物体,会提高接受能力
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问
请教大鼠鞘内腺相关病毒注射怎么操作呢?是需要鞘内置管 还是可以像小鼠一样定位注射?
土井挞克树
如果需要联系注射建议置管。如果是单次注射可以不置管
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问
6E,8E质粒载体是干嘛用的,怎么使用?实验步骤具体操作?
土井挞克树
质粒载体是辅助dna片段序列插入的载体。
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问
大鼠处死后,心肝脾肺肾等各器官需要多久内固定才能较好地保存组织结构,求大神解惑~
huarenqiang5
一般固定12至24小时最为合适。
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问
LLC肺癌组织如何分离为细胞做流式?
土井挞克树
不考虑后续的话建议胰酶,胶原酶、透明质酸酶和DNA酶都加用,可以裂解的好一些
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问
免疫组化问题求助??
huarenqiang5
100℃水浴加热法,一般不会导致组织里面的蛋白、酶等生物活性物质失活。沸热修复电炉或水浴锅加热0.01柠檬酸钠缓冲液(ph6.0)至95℃左右,放入组织芯片加热10-15分钟。
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问
小鼠脊柱骨折模型制备需要注意些什么,才能提高模型成功率
土井挞克树
需要注意制备的时间,一般是新生鼠一个月后进行制备比较好
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