荧光微球标记出现聚集现象求助？

主要考虑以下几点原因：

1.缓冲体系PH太低的问题。

2.超声不完全，尤其在喷金前，就很容易出现堵膜现象。

3.活化剂EDC和NHS的用量、还有活化时间、抗体用量、有没有封闭好也都是有可能会造成堵膜的。

4.微径大了，微球浓度过高。

出现沉淀两种可能性， ph不对，或者偶联时间太长。

这可能是由于BSA不充分溶解或不适当的pH或离子强度条件导致的。

MES缓冲液在pH5-7的条件下具有最佳缓冲能力，但它可能不太适合于封闭剂，因为它本身是一种亲酸性物质，可能与某些蛋白质结合并导致沉淀。改用PBS缓冲液复溶可能会更好，因为PBS缓冲液具有适当的离子强度和pH值，可以保持微球的稳定性，并且更适合用作蛋白质封闭剂。

此外，如果您的荧光微球标记在复溶PBS缓冲液后仍然出现聚集和沉淀，可能需要优化您的洗涤步骤或采用其他封闭剂来解决这个问题。