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        做PE通道的正选细胞少阳性率不高

        相关实验:免疫磁珠分选免疫细胞及其亚群

        user-title

        dxy_84hgxro5

        转染效率在80%以上了,做正选尽可能的吹打成单细胞悬液,但是分选出来阳性率还是达不到95%

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        3 个回答

        user-title

        huarenqiang5

        有帮助

        主要考虑以下几点:1.抗体质量问题;2.细胞密度过低;3.操作上的问题导致。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        可以适当增加上样量,或者调节pe通道的筛选宽度

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        可能有以下原因:

        细胞异质性:如果您的细胞种群存在异质性,即细胞表面标志物的表达不同,那么您所选的阳性细胞也会包含不同表达程度的细胞。这可能是导致阳性率不到95%的原因之一。

        细胞密度:如果您使用的细胞密度过低,可能会导致细胞在分选过程中相互影响,降低阳性率。建议尝试使用较高的细胞密度进行正选。

        抗体质量:如果您所用的抗体质量不好,可能会导致识别阳性细胞时的误差,从而导致阳性率偏低。建议使用质量更好的抗体,并对抗体进行充分的验证。

        流式细胞仪设置:如果流式细胞仪的设置不正确,可能会导致误差,从而降低阳性率。建议对仪器进行充分的校准和优化。

        为了提高阳性率,建议尝试以下优化措施:

        在正选过程中,尽可能使用多个标记来鉴别阳性细胞,以减少细胞异质性对结果的影响。

        使用较高的细胞密度进行正选,并对细胞进行充分的均匀混合,以减少细胞间的影响。

        优化抗体的使用条件,如抗体浓度和孵育时间,以提高抗体的特异性和灵敏度。

        在进行流式细胞仪分选前,对仪器进行充分的校准和优化,以确保数据的准确性。


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