huarenqiang5
主要考虑以下几点:1.抗体质量问题;2.细胞密度过低;3.操作上的问题导致。
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可以适当增加上样量,或者调节pe通道的筛选宽度
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可能有以下原因:
细胞异质性:如果您的细胞种群存在异质性,即细胞表面标志物的表达不同,那么您所选的阳性细胞也会包含不同表达程度的细胞。这可能是导致阳性率不到95%的原因之一。
细胞密度:如果您使用的细胞密度过低,可能会导致细胞在分选过程中相互影响,降低阳性率。建议尝试使用较高的细胞密度进行正选。
抗体质量:如果您所用的抗体质量不好,可能会导致识别阳性细胞时的误差,从而导致阳性率偏低。建议使用质量更好的抗体,并对抗体进行充分的验证。
流式细胞仪设置:如果流式细胞仪的设置不正确,可能会导致误差,从而降低阳性率。建议对仪器进行充分的校准和优化。
为了提高阳性率,建议尝试以下优化措施:
在正选过程中,尽可能使用多个标记来鉴别阳性细胞,以减少细胞异质性对结果的影响。
使用较高的细胞密度进行正选,并对细胞进行充分的均匀混合,以减少细胞间的影响。
优化抗体的使用条件,如抗体浓度和孵育时间,以提高抗体的特异性和灵敏度。
在进行流式细胞仪分选前,对仪器进行充分的校准和优化,以确保数据的准确性。
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