实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问RNA中有DNA污染的处理方式有哪些

huarenqiang5

彻底去除基因组 DNA 最为可靠的方法是采用 DNase I消化。 DNase On Column Kit 可配合 HiPure RNA抽提试剂盒一起使用。组织/细胞样品经裂解液裂解后，转移至 HiPure RNA Column吸附 RNA，加入 DNase至柱子的滤膜中消化去除 DNA，然后加入洗涤液洗涤去除 DNase 和降解的 DNA。 1

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问克隆PCR产物的最优条件是什么？

huarenqiang5

插入最佳片段后室温保温1h，或4℃过夜。在这2种温度下，缺T-凸出端的载体会自连，产生蓝斑。室温保温1h能满足大多数克隆要求，为提高连接效率，需4℃过夜。

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问重链曝不出来目的条带却能曝出来

土井挞克树

可能的原因有 3 个： 1）一抗效价不好。 2）抗原太稀。 3）封闭时间过长。解决的方法： 1）换用一抗或增加一抗用量。 2）增加抗原浓度。 3）缩短封闭时间，封闭时间一般 37 摄氏度 3 个小时，或者 4 摄氏度过夜。不能比这个更长了。

3 回答293 围观

问GM-DC诱导失败无数次，求大神指点

huarenqiang5

建议开始用不含GM-CSF培养至少3小时至几十小时后再加GM-CSF进行。

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问做PE通道的正选细胞少阳性率不高

huarenqiang5

主要考虑以下几点：1.抗体质量问题；2.细胞密度过低；3.操作上的问题导致。

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问蛋白免疫印记实验中，无蛋白的区域具有高背景，洗涤非常充分，孵化温度也比较合适，会是什么原因

土井挞克树

可能是封闭液的原因，封闭液的浓度偏低，封闭时间过短，导致封闭不彻底，抗体与酶标板孔结合，也可能导致无蛋白区域背景偏高。

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问Elisa实验结果白板，对照不显色，咋办呀？

huarenqiang5

考虑以下几点原因：1.将终止液当做底物或者酶结合物使用2.洗涤液桶受到污染，有YZ酶活性的物质存在或者蒸馏水受到污染。

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问Elisa实验中，结果空白背景高，一般是什么原因？

huarenqiang5

常见原因如下：1）洗板不干净；2）显色液变质或者试剂过期；3）试剂稀释有误，如加酶的浓度过高；4）蒸馏水受酶等污染；5）试剂混用；6）培养箱温度超过37℃或反应时间过长。

3 回答1344 围观

问有没有测甲基化相关酶活性的方法？

huarenqiang5

传统用于检测DNA甲基化酶活性的方法包括高效液相色谱法(HPLC)，聚合酶链反应(PCR)，凝胶电泳，高效毛细管电泳(HPCE)，以及使用同位素标记的s-腺苷甲硫氨酸甲基化检测。替代的DNA甲基化酶活性测定方法，如放射法、比色法、荧光法、电化学法等。

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问悬浮细胞涂片让染色问题

huarenqiang5

这几种染色方法细胞涂片都不能完全干燥，否则会影响结果。

3 回答805 围观

问请大神帮我看看时长满了还是污染？

huarenqiang5

你这个污染比较严重，建议及时处理一下看看。

3 回答565 围观

问荧光微球标记出现聚集现象求助？

huarenqiang5

主要考虑以下几点原因：1.缓冲体系PH太低的问题。2.超声不完全，尤其在喷金前，就很容易出现堵膜现象。3.活化剂EDC和NHS的用量、还有活化时间、抗体用量、有没有封闭好也都是有可能会造成堵膜的。4.微径大了，微球浓度过高。

3 回答1962 围观

问求助免疫荧光相关问题？

huarenqiang5

做大鼠血管的免疫荧光检测，取材后一般固定24-48小时。对于血管免疫荧光检测来说石蜡切片相对来说要好点。

3 回答164 围观

问免疫荧光微球的问题？

huarenqiang5

建议做一下电镜或者用粒度仪测一下粒径，到底聚集到什么程度，如果是聚集的验证，那就要在偶联的方案上做改变，比方说EDC的用量，微球的用量，偶联的过程、缓冲体系等，缓冲体系一般用MES和硼酸体系，都可以试下，另外，你跑条时的表面活性剂也要摸索下，这个很关键。还有就是你如果只是药物筛选，完全可以把荧光标记物液态保存，不必喷到样品垫上去，这样也有利于释放。

3 回答627 围观

问检测疫苗免疫效果时，有淋巴细胞分型实验，这个一定要用流式检测吗，看到网上有elisa试剂盒，可以选择吗？

huarenqiang5

检测疫苗免疫效果时，淋巴细胞分型实验，可以用elisa试剂盒。

3 回答325 围观

问检测疫苗的免疫效果一般选择哪些指标？

土井挞克树

可以检测抗体产生速率及有效期。

3 回答448 围观

问RNA电泳条带这样可以用吗？

土井挞克树

看着还是不错的，可以用image把细节修复一下。

4 回答636 围观

问免疫荧光是不是必须要有空白对照、阴性对照和同型对照，如果少了一个是不是要再做一次啊？

土井挞克树

不可以只设一种，你提到的都需要对照，缺乏对照的话统计学上误差增加

3 回答838 围观

问霉菌的药敏试验怎么做？

huarenqiang5

可以按以下步骤进行：1、琼脂平板制备按照营养琼脂干粉说明来进行稀释，稀释后琼脂放在微波炉里进行加热，加热后琼脂移至超净工作台中，静置待温度降至50℃（手指能接受的最高温度）左右时，开始倒平板，内径225px平皿每个平皿倒入约10ml琼脂液，倒入后迅速混匀铺满平皿底部。2、药液制备：按药品使用说明书上的配料或饮水浓度配置按1g需加多少毫升水或配多少毫克饲料，就相当于配制药液所加蒸馏水的毫升数。如10

3 回答1694 围观

问蛋白质免疫印迹实验为什么要蛋白质还原和变性

loveliufudan

蛋白质免疫印迹实验中的蛋白质样本还原和变性是为了使其线性化并暴露出可被抗体识别的特定蛋白结构，这样可以提高抗体的特异性和亲和力。还原是指还原性试剂（如二巯基乙醇）将蛋白质中的二硫键还原成单个硫原子，使其变为线性状态。这对于有多个二硫键的蛋白质尤为重要，因为二硫键交联的结构会使蛋白质失去线性性和空间构象，从而影响抗体的结合效率和特异性。变性是指蛋白质在高温或有机溶剂等条件下发生的结构变化，使其失去原

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