实验问答

21,822,039 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

全部

细胞

问Tau磷酸化位点很多，抗体怎么选，有什么区别？

土井挞克树

就我所做的tau抗体来说说我觉得你选择tau1,tau5,AT8三种抗体就可以了tau5可以作为tau总蛋白的定量而tau1，磷酸化位点为ser199/202.在体时主要标轴突的。

2 回答5254 围观

问FITC-CM-Dextran 怎么配

huarenqiang5

7.6gNaHCO3，1.06gNa2CO3，7.36gNaCl，加水定容至1L。将FITC溶于DMSO中，浓度为1mg/mL。每次交联使用的FITC均应新鲜配制，避光。

2 回答687 围观

问大分子量蛋白200kDa，在做western blot要注意什么

loveliufudan

在进行 Western blot 实验时，对于大分子量蛋白（如200 kDa）的检测需要特别注意以下几点：蛋白质的迁移：由于大分子量蛋白分子较大，迁移速度较慢。为了充分迁移，需要增加电泳时间、电压或使用缓冲液含有特殊的离子浓度梯度。蛋白质的转移：大分子量蛋白转移至膜上的效率可能较低，因此需要更长的转移时间和更高的电流来促进转移。膜的选择：选择适合大分子量蛋白检测的膜。例如，PVDF（聚偏氟乙烯）膜

3 回答1443 围观

问western blot免疫印迹实验，目的带很弱，要怎么加强

土井挞克树

增强上样浓度和上样量，延长一抗孵育时间

3 回答547 围观

问请问一下柠檬酸钠比色法具体操作过程？

loveliufudan

柠檬酸钠比色法是一种常用于测定葡萄糖含量的方法，下面是具体操作步骤：首先将样品制备好，一般是将待测样品经过必要的处理，比如去除杂质、稀释等，使其适合测定。准备一定浓度的柠檬酸钠试剂，通常是1%柠檬酸钠溶液。将样品加入比色管中，再加入适量的柠檬酸钠试剂，混匀。将比色管放入沸水中加热10分钟，使其反应完全，然后取出冷却至室温。加入10倍体积的稀释液，混匀后使用分光光度计在波长为520nm处测定吸光度值

2 回答522 围观

问毕业论文做的科里一个老师的课题，我做的方案年龄有拓宽，还需要重新过伦理审核吗？

sswei

需要进行伦理资料补充审核。两个老师都写上去。

4 回答489 围观

问免疫组化实验中，出现边缘效应怎么办？

loveliufudan

这可能是由于标本处理、抗体染色、显微镜成像等因素引起的。以下是一些可能的解决方法：在标本处理过程中要尽可能避免损伤标本边缘，特别是在切片过程中。在抗体染色前，将标本边缘用胶带覆盖，以减少标本边缘的信号干扰。在显微镜成像时，尽可能调整焦距和曝光时间，确保标本中央和边缘区域的信号平衡。如果使用数字成像系统，可以对图像进行后处理，如修剪边缘区域或调整图像亮度和对比度等。对于细胞免疫组化，可以尝试调整细胞

3 回答1068 围观

问请问配制1%的STZ溶液如何计算试剂量

loveliufudan

以下是柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液的配制方法和计算步骤：首先确定你要制备多少升缓冲液，比如说1升。根据你要制备的升数和缓冲液的配方，计算出你需要的柠檬酸一水和柠檬酸三钠二水的质量，可以通过配方中的摩尔比例计算。具体计算公式为：质量（g）= 摩尔质量（g/mol）× 摩尔数（mol）× 升数（L）例如，你要制备1升柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，pH为6.5，配方为A液：0.1 mol/L 柠檬酸一水，B液：0.

2 回答1910 围观

问热蛋白组学实验，在用液氮冻融裂解hepG2细胞后，BCA定量细胞蛋白浓度过低是什么原因呢？

huarenqiang5

主要考虑：1.可能细胞状态不好；2.蛋白与蛋白间性质差异大；3.BCA反应非线性，测定时可能出现偏差，要精度准确，做标准曲线时的点设置多些；4.试剂BCA，一般最低检测限5ug/ml，灵敏度要达到1ug/ml，必须采取加强法测定，比如样品多加几倍。

3 回答815 围观

问最近遇到了小鼠免疫问题

huarenqiang5

主要考虑可能是PH问题导致。确保抗原溶液本身 pH 在 5-9 之间，从而与佐剂混合后可以被缓冲至中性。

3 回答227 围观

问有淋巴细胞做抗原实验

huarenqiang5

免疫同一只小鼠建议用同一品类的血液提取的淋巴细胞。免疫小鼠1.0×10-2.5×10 个脾细胞。

3 回答323 围观

问酶放大免疫实验技术

huarenqiang5

荧光标记技术：是把荧光基团的共价键连接到蛋白、核酸等能够识别分子物质上的一种技术。目前有新型的一种免疫荧光信号放大技术标记方法是荧光标记技术中的一种。

3 回答446 围观

问用钙离子浓度检测试剂盒有结果，而且实验组和对照组差异很大，但是做硝酸银染色都是阴性

huarenqiang5

你的这个情况主要考虑可能是操作问题导致，建议重新做对比分析一下。

3 回答316 围观

问杂交瘤细胞什么时候进行传代？

huarenqiang5

当细胞处于对数生长的中期时，可按1:3~1:10的比例传代。每3~5天传代一次。

4 回答610 围观

问transwell染色后用PBS洗三遍晾干后有结晶是啥原因？

loveliufudan

结晶的出现可能是由于使用的PBS中含有过多的离子，这些离子在干燥过程中结晶，导致结晶形成。为了避免结晶的出现，可以尝试使用去离子水代替PBS进行洗涤，并在洗涤后彻底干燥Transwell膜。另外，也可以调整PBS的pH值，以确保其最大限度地溶解其中的盐类。

3 回答829 围观

问激光共聚焦显微镜与荧光显微镜显示的染色结果为何不同？

huarenqiang5

1、荧光显微镜：荧光显微镜是免疫荧光细胞化学的基本工具。它是由光源、滤板系统和光学系统等主要部件组成。是利用一定波长的光激发标本发射荧光，通过物镜和目镜系统放大以观察标本的荧光图像。2、激光共聚焦显微镜：激光扫描共聚焦显微技术已用于细胞形态定位、立体结构重组、动态变化过程等研究，并提供定量荧光测定、定量图像分析等实用研究手段，结合其他相关生物技术，在形态学、生理学、免疫学、遗传学等分子细胞生物学领

3 回答1043 围观

问做间接法免疫荧光染色要怎么设置对照？

土井挞克树

可以用已知的组织做阳性对照。或者直接做空白对照简单一些

3 回答1004 围观

问荧光免疫组化实验中，和核染对照组超过多少百分比一致才认为目的蛋白是核表达？

huarenqiang5

和核染对照组一般要超过80%时才表示目的蛋白是核表达。

3 回答226 围观

问wb抗体和elisa抗体有什么不同要求？

sswei

一般来说用于 western 的抗体主要识别氨基酸序列特异性；而可用于 ELISA 的抗体则要看抗原种类，有些是识别氨基酸序列特异性，有些是识别构像特异性。所以一般根据抗体说明书来确定。做免疫印迹时选择抗体主要应考虑两个问题，一是所选抗体是否能识别凝胶电泳后转印至膜上的变性蛋白，另一个是所选抗体是否会引起交叉反应条带。

3 回答1231 围观

问流式中，标记的抗体已经验证过，但却无法正确鉴定特定类型的免疫细胞。我该怎么确定鉴定的准确性？

sswei

如果是外周/脾脏/淋巴结的免疫亚群鉴定，在进行红细胞裂解或者梯度密度离心后所获得细胞都是纯度非常高的PBMC，可以在流式细胞仪上通过FSC和SSC这2个形态学通道明确的选出免疫细胞。但一些病人的样本或者是一些处理不好的样本，很难从FSC和SSC通道上获得明确的PBMC形态，此时就应该检测CD45来严谨的gate出免疫亚群了。

2 回答388 围观

关于丁香通

公司信息

个人用户

企业机构

无忧采购轻松科研

提问

扫一扫

实验小助手

扫码领资料

反馈

TOP

打开小程序