实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

全部

细胞

问为什么视野中细胞与细胞之间存在散在的发光点？

土井挞克树

那是非特异性结合产生的背景荧光。属于干扰

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问qPCR加样方法小技巧

sswei

加样操作方法，以便更好的开展工作。使用流程：拧到需要的量程，装上枪头，然后手握住枪柄，大拇指按住上面的按钮至第一档位，枪头插入试剂液面下，轻轻松开拇指按钮，移出试剂，把枪头插入要加入试剂的管子，拇指按下枪头，为了把枪头里面的试剂残留都打出去，拇指要用力按至第二档位。用过的枪头如果不用了，可以用拇指按住枪顶端的另一个按钮，把枪头打掉，落到废液缸里。 1、加样前，一定要检查吸头是否上紧，以免液体

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问为什么磁珠优先吸附大片段而不是小片段？为什么磁珠表面带负电还可以吸附DNA？

huarenqiang5

磁珠会优先吸附大片段DNA，是因为在一定浓度的PEG和盐离子体系中，片段更长的DNA会因失水暴露更多的磷酸基团，然后在盐离子如钠离子的作用下，优先与磁珠结合，而更小的DNA片段则不结合。

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问相同粒径的磁珠，是否提取DNA的能力就一样了？

huarenqiang5

相同粒径的磁珠提取DNA的能力不相同。

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问封片的时候是周边点上封片液，还是点到中间，永久封片怎么弄？

huarenqiang5

封片的时候只需要在中间点封片液。永久装片的封片方法，包括以下步骤： 1.封片胶包裹标本：将标本置于封片胶中，使标本与封片胶充分接触，在封片胶中缓慢拖动标本至标本周围无小气泡为止，取出标本，得到包裹有封片胶的标本；将包裹有封片胶的标本转移至盖玻片上，得到带有标本的盖玻片； 2.载玻片滴封片胶：在载玻片上滴加封片胶，得到带有封片胶的载玻

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问转录组数据中的CDS序列可以用于设计引物吗

huarenqiang5

转录组数据中的CDS序列能够用于设计引物。

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问基础医学科研小白如何写实验设计呀？

sswei

实验设计的最重要的三个要素是研究目的、研究假设和研究方法。这三个要素决定了研究的成果，是完成科学研究的基础。实验设计总共有四个基本原则，它们分别是：1、对照原则；2、实验条件一致性原则；3、随机化原则；4、重复性原则。实验设计的基本方法一、明确实验目的实验目的是实验设计的出发点，要明确对象、范围和研究目的。二、作出假设（实验目的的具体化）假设是实验设计的关键步骤，实验设计就是要根据假设去寻

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问免疫沉淀实验，电泳后考染/银染，BSA粉末是否有背景干扰

土井挞克树

会有背景干扰，粉末有时候溶解不足就会产生背景干扰

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问求助最近要做细胞免疫荧光

土井挞克树

如何可以使用质粒转染或者也可以进行胞吞入核，比较难，需要多练习

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问免疫磁珠分选与其他分选技术（如流式细胞术）相比有何优缺点？

huarenqiang5

流式分选一般都是电荷式分选，即对感兴趣的目标细胞所在的液滴充上电荷，液滴经过电极板，通过电场作用发生偏转，从而实现分选。磁珠分选首先使用磁珠偶联的抗体去标记细胞，然后把标记好的细胞过柱子，带磁珠的细胞就留在柱子上，不带磁珠的细胞就流走了，从而实现分选。不同点： 1、对细胞的刺激。磁珠分选最

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问检测疫苗免疫效果时，有文献会做淋巴细胞增殖实验，请问是用脾细胞做效果好还是用外周血的细胞效果好？

huarenqiang5

淋巴细胞增殖实验用外周血的细胞来做相对来说效果要好。

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问原代细胞培养贴壁性差如何改进？

sswei

大多数原代贴壁细胞贴壁时间是6h到12h，细胞不贴壁有好多种原因的：1、如果你用玻璃培养瓶培养的话，有可能你的瓶子没处理好；建议你用一次性培养瓶，进口的都可以。2、一般做原代细胞贴壁培养用胰酶消化，消化的程度要掌握好，如果消化时间不到、分散不均匀不贴壁。一般消化有热消化，就是放在37度里消化，时间比较短不好控制，传代培养常用。还有就是冷消化放在4度里，一般在几个小时以上，胰酶浓度也有要求的，一般都

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问dl甘油醛能用pbs溶解吗

huarenqiang5

可以用pbs来溶解dl甘油醛。

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问如何收集不同类型的样本并避免样本的衰竭？在采集血液样本时，应该如何处理血液样本以保持样本的完整性？

huarenqiang5

1.全血采集全血样品后，装入含适当抗凝剂的容器内防止凝集。血液采集后要尽快与抗凝剂混合，但一定要注意摇动手法应轻柔。剧烈晃动可造成溶血，导致红细胞内的化学物质释放入血浆，从而影响分析结果的准确性。2.血浆血浆样品制备：最好在采样后1 h内离心，如果无条件达到，应使用肝素抗凝后冷藏保存。若冷冻过夜，检测前需要再次离心。①采集血液样本，置于含有适量抗凝剂的试管内②缓慢摇动试管，混匀

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问免疫印迹实验所有条带连成片

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原因最可能是样品量上的太多，其次是电泳长时间停止样品弥散。

3 回答135 围观

问目的基因260bp左右，导入19t载体用M13引物做菌落PCR鉴定，产物应该多大？谢谢

sswei

如果模板序列已知的话，直接将引物序列和模板进行匹配，两条引物之间的DNA片段长度即为目的PCR产物的大小；如果想知道PCR仪反应后的产物大小，可以跑琼脂糖凝聚电泳，照胶仪下根据Marker的指示条带读取产物的大小，或者可以用照胶仪自带的软件直接读出所有pcr产物条带的大小。

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问基因工程疫苗的制备需要注意哪些问题？

土井挞克树

需要注意，载体与表达系统既要能够高效表达外源基因，又要保证基因工程疫苗的安全性

3 回答493 围观

问四因素三水平正交实验。

sswei

不合理，需要对整个实验重新进行。

3 回答633 围观

问有没有提原生质体的大佬呀，可不可以帮我看下我这提出来的是不是原生质体呀（材料是木本植物叶片，叶片很小，属于针叶，40倍镜下观察的

sswei

原生质体就是植物细胞除去细胞壁后剩下的部分，该片显示少，建议再多做几张片。

2 回答476 围观

问动物组织qpcr跑不出来

dxy_c430nxh5

可以排除仪器，操作，试剂的问题那就是实验设计的问题了，你前后换了组织，该组织里面可能不含有你想要的目的基因，内参基因能出来是正常的，因为它存在所有的组织里面，但是你得目的基因不一定存在你后面的组织里面

4 回答922 围观

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