实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问重链曝不出来目的条带却能曝出来

土井挞克树

可能的原因有 3 个： 1）一抗效价不好。 2）抗原太稀。 3）封闭时间过长。解决的方法： 1）换用一抗或增加一抗用量。 2）增加抗原浓度。 3）缩短封闭时间，封闭时间一般 37 摄氏度 3 个小时，或者 4 摄氏度过夜。不能比这个更长了。

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问蛋白免疫印记实验中，无蛋白的区域具有高背景，洗涤非常充分，孵化温度也比较合适，会是什么原因

土井挞克树

可能是封闭液的原因，封闭液的浓度偏低，封闭时间过短，导致封闭不彻底，抗体与酶标板孔结合，也可能导致无蛋白区域背景偏高。

3 回答248 围观

问有没有测甲基化相关酶活性的方法？

huarenqiang5

传统用于检测DNA甲基化酶活性的方法包括高效液相色谱法(HPLC)，聚合酶链反应(PCR)，凝胶电泳，高效毛细管电泳(HPCE)，以及使用同位素标记的s-腺苷甲硫氨酸甲基化检测。替代的DNA甲基化酶活性测定方法，如放射法、比色法、荧光法、电化学法等。

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问悬浮细胞涂片让染色问题

huarenqiang5

这几种染色方法细胞涂片都不能完全干燥，否则会影响结果。

3 回答761 围观

问请大神帮我看看时长满了还是污染？

huarenqiang5

你这个污染比较严重，建议及时处理一下看看。

3 回答523 围观

问荧光微球标记出现聚集现象求助？

huarenqiang5

主要考虑以下几点原因：1.缓冲体系PH太低的问题。2.超声不完全，尤其在喷金前，就很容易出现堵膜现象。3.活化剂EDC和NHS的用量、还有活化时间、抗体用量、有没有封闭好也都是有可能会造成堵膜的。4.微径大了，微球浓度过高。

3 回答1872 围观

问求助免疫荧光相关问题？

huarenqiang5

做大鼠血管的免疫荧光检测，取材后一般固定24-48小时。对于血管免疫荧光检测来说石蜡切片相对来说要好点。

3 回答143 围观

问免疫荧光微球的问题？

huarenqiang5

建议做一下电镜或者用粒度仪测一下粒径，到底聚集到什么程度，如果是聚集的验证，那就要在偶联的方案上做改变，比方说EDC的用量，微球的用量，偶联的过程、缓冲体系等，缓冲体系一般用MES和硼酸体系，都可以试下，另外，你跑条时的表面活性剂也要摸索下，这个很关键。还有就是你如果只是药物筛选，完全可以把荧光标记物液态保存，不必喷到样品垫上去，这样也有利于释放。

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问检测疫苗免疫效果时，有淋巴细胞分型实验，这个一定要用流式检测吗，看到网上有elisa试剂盒，可以选择吗？

huarenqiang5

检测疫苗免疫效果时，淋巴细胞分型实验，可以用elisa试剂盒。

3 回答305 围观

问检测疫苗的免疫效果一般选择哪些指标？

土井挞克树

可以检测抗体产生速率及有效期。

3 回答413 围观

问在测量多糖中蛋白质含量时，是否可以使用BCA测量，对比使用Bradford法哪种方法更适合，为什么？

loveliufudan

BCA和Bradford法都是常用的蛋白质测量方法，但是它们对多糖的干扰程度不同。通常情况下，多糖会干扰Bradford法的测量，导致高估蛋白质含量。而BCA法对多糖的干扰相对较小，更适合测量多糖中蛋白质的含量。因此，如果需要测量多糖中蛋白质的含量，建议选择BCA法进行测量。但是，如果待测样品中没有多糖的干扰，Bradford法也可以使用。需要根据具体情况选择合适的方法。

3 回答1433 围观

问RNA电泳条带这样可以用吗？

土井挞克树

看着还是不错的，可以用image把细节修复一下。

4 回答602 围观

问请问细胞铺96孔板先给药预保护俩小时再加造模剂，最后测细胞活力。这期间给药和造模剂的浓度怎么控制?

huarenqiang5

浓度每一孔250μl。通常每一孔不少于100μl。

3 回答1112 围观

问免疫荧光是不是必须要有空白对照、阴性对照和同型对照，如果少了一个是不是要再做一次啊？

土井挞克树

不可以只设一种，你提到的都需要对照，缺乏对照的话统计学上误差增加

3 回答791 围观

问Elisa实验中无法检测出弱阳性质控的样本，是由于什么原因造成的？

loveliufudan

可能有以下几个原因：抗原过少：如果样品中的抗原浓度过低，可能会导致无法检测出弱阳性结果。在这种情况下，可以尝试增加样品的浓度或者使用更敏感的检测方法。洗涤不彻底：洗涤步骤是Elisa实验中非常重要的一个环节，如果洗涤不彻底，可能会导致样本和检测试剂之间的非特异性结合，从而产生高背景信号，影响结果的准确性。建议仔细检查洗涤步骤是否正确执行。抗体浓度不足：如果使用的抗体浓度过低，可能会导致检测的灵敏度

4 回答369 围观

问Wb上样浓度应该选择多少？

balalaLy

应该是看蛋白量吧，一般20ug总蛋白就可以了

3 回答2871 围观

问Western blot 总是出现固定的一条强杂带

balalaLy

有些抗体会出现杂带是正常现象，但是你这个普遍都有而且位置差不多，应该就不是一抗的问题，换一个二抗试试

4 回答569 围观

问非特异性免疫荧光染色

balalaLy

可以适当延长封闭时间或者提高封闭液的血清浓度

3 回答421 围观

问ELISA操作咨询各位前辈

sswei

ELISA中加样须注意如下问题：　　1.吸取样品时，加样枪吸头不应黏附多余的液体;加样时不可90度向孔中滴加液体，这样会导致液体残留在吸头上，加样不准确!　　2.不要将吸头伸入孔中，一方面若接触孔底可能压弯吸头，另一方面可能会将孔中的液体吹起来，加样不准确!　正确的加样方法应为45度，吸头贴着孔壁加入，应注意：　　1.角度太小，会使液体残留在孔壁上，导致加样不准确!　　2.吸头应当贴着管壁和液面的

3 回答314 围观

问蛋白质免疫印迹实验为什么要蛋白质还原和变性

loveliufudan

蛋白质免疫印迹实验中的蛋白质样本还原和变性是为了使其线性化并暴露出可被抗体识别的特定蛋白结构，这样可以提高抗体的特异性和亲和力。还原是指还原性试剂（如二巯基乙醇）将蛋白质中的二硫键还原成单个硫原子，使其变为线性状态。这对于有多个二硫键的蛋白质尤为重要，因为二硫键交联的结构会使蛋白质失去线性性和空间构象，从而影响抗体的结合效率和特异性。变性是指蛋白质在高温或有机溶剂等条件下发生的结构变化，使其失去原

4 回答1091 围观

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