实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问人脐静脉内皮细胞细胞培养问题。

土井挞克树

看着像是细菌污染，应该立即消毒杀菌

3 回答438 围观

问未灭菌大肠杆菌倒入下水道

土井挞克树

已经到了没有办法了，但是确实容易造成污染

3 回答251 围观

问免疫荧光双重标记问题？

土井挞克树

如果非特异性程度高的话，那一般出现双重标记的可能性比较低

3 回答495 围观

问细胞孵育完IgG抗体会影响后续加药吗

sswei

可能存在抗体不识別或抗体选择错误等情况。

3 回答362 围观

问免疫荧光问题求助细胞显微镜观察

土井挞克树

可能是你应该非特异性结合的部分太多了。

3 回答280 围观

问什么是析出沉淀制备混悬液？

土井挞克树

就是原本用水溶的更换醇溶，更换溶剂后溶解度会改变

3 回答381 围观

问pcr，加大模板后，条带亮度没有变化(不怎么亮)，这时候要从哪里入手呢?已经跑过温度梯度了，选择了最亮的那个温度。

土井挞克树

从抗体入手，没有亮度考虑是抗体的特异度不够

3 回答412 围观

问胶乳增强免疫比浊试剂稳定性的相关问题

土井挞克树

先把沉淀去除，用上清液再观察七天。

3 回答1555 围观

问 pull down实验使用的细胞不同会对实验有影响吗

土井挞克树

会有影响的，建议用同一种细胞，不然统计学上就会引起质疑

2 回答356 围观

问WB条带很丑，而且还是皱眉条带?

土井挞克树

蛋白的浓度太大，而且ph也需要调节

3 回答715 围观

问切片用H2O2处理的目的是什么？

sswei

为了去除过氧化氢酶，影响DAB染色。

3 回答1110 围观

问我的组织就是肝组织，含有很多内源性的生物素，由于亲和素会与生物体内的内源性生物素反应，从而有非特异性着色，如何解决？

sswei

封闭内源性生物素：将组织切片用0．0l％亲和素溶液室温处理10～20分钟，使其结合位点饱和，以消除内源性生物素的活性。也可购买生物素阻断剂试剂盒，其中A液为亲和素．B液为生物素。使用时加A液l滴，室温10分钟，PBS冲洗3次，每次2分钟；加B液1滴。室温10分钟．PBS冲洗3次，每次2分钟。

2 回答300 围观

问请问WB检测培养基里面分泌蛋白的表达量，可以用什么内参？

土井挞克树

可以用actin做内参，比较稳定

2 回答703 围观

问为什么质粒转化涂平板前要离心

土井挞克树

涂板前要离心进行纯化，把杂质去除。

3 回答720 围观

问大佬们，southern blot 结合标记探针为什么还要染色

sswei

EB染色剂可以用来检测单链或双链核酸(DNA或RNA)。但是染料对单链核酸的亲和力相对较小,所以其荧光产率也相对较低。

3 回答404 围观

问一个抗体做WB和IP没问题，条带很强，但是IHC没信号。而且我做IHC时同步做了另一个抗体的，信号很强，可能的原因是什么呢？

sswei

无信号-阴性结果1、真阴性结果：组织或细胞不表达抗原，无法检测到相应信号;或抗原表达量太低，无法检测到相关信号。2、假阴性结果（1）免疫组化染色前错误：切片时选错蜡块和拿错切片，这种情况可用H&E染色验证。（2）免疫组化染色操作错误：①确认是否忽略了应加的某种试剂，包括一抗抗、底物等。②确认所有的试剂是否按正确的顺序加入，是否在足够的温度条件下解音了足够的时间。③复查抗体的标签确认是否使用

4 回答414 围观

问为什么毕赤酵母诱导蛋白的酶液有酶活没有蛋白条带？

loveliufudan

毕赤酵母诱导蛋白的酶液有酶活但没有蛋白条带可能有以下几个原因：1.蛋白质表达量很低：在SDS-PAGE分离蛋白质的过程中，如果表达量很低，可能无法检测到蛋白条带。2.蛋白质在毕赤酵母中表达不稳定：毕赤酵母中的表达系统和真核生物不同，蛋白质的表达往往是暂时的、非常短暂的。如果蛋白质表达不稳定，可能在采集样品的过程中已经被降解或丢失。3.蛋白质被部分降解或结构发生改变：蛋白质在毕赤酵母中表达时，可能会

3 回答563 围观

问求问各位大佬图中这种糊糊状的东西是什么原因造成的，图一是前两天拍的，图二今天细胞已经死掉了

蓝莓小布丁

有可能是细菌污染从而影响细胞的生存，建议细胞实验严格控制灭菌。

3 回答264 围观

问GraphPad prism软件计算IC50数据处理问题

loveliufudan

GraphPad Prism是一款常用的统计分析软件，可以进行不同类型的数据拟合。在拟合曲线时，常用的方法包括不拟合、三参数、四参数和五参数拟合。下面是这些方法的简单介绍和使用场景：不拟合如果数据本身不需要拟合曲线，那么可以选择不进行拟合。例如，对于一些分类数据或者纯粹的描述性统计数据，可能不需要进行拟合。三参数拟合三参数拟合通常用于拟合带有截距的曲线数据，其方程形式为：Y = Bottom +

3 回答4145 围观

问阳性样本FAM通道有值，VIC通道没出，是什么原因？

dxy_rnzkkoz9

把你的基线改一下呢，把1到15个循环拉直了再看。

4 回答1388 围观

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