用transwell对巨噬细胞和肺成纤维细胞共培养？

实验步骤:

1、效应细胞接种到transwell小室中，培养24小时。

2、靶细胞接种到细胞培养板中，培养24小时。

3、过夜培养后，将transwell小室和培养板中的培养液除去，下室加入新的培养液。

4、将transwell小室放入细胞培养板中并加入新的培养液，培养48-72小时后进行检测。

5、取出transwell小室，吸出细胞培养板中的培养液。

6、PBS洗涤细胞培养板两次，4%多聚甲醛固定细胞。

7、免疫荧光检测法对细胞拍照。

8、选取5-10个视野计。

可应用MTT方法酶标仪上测OD值。

1.对于研究巨噬细胞分泌的细胞因子对肺成纤维细胞的影响，可以将巨噬细胞和肺成纤维细胞分别放在上下两个室中，然后通过滤膜隔离，观察细胞因子的影响。这个实验方法称为“Transwell分析”，可以分离上下两个室中的细胞，并通过滤膜进行交流，但是不会直接接触。

2.“Transwell侵袭”实验是指将一种细胞移植到Transwell滤膜的上室，然后在下室中放置另一种细胞，观察移植细胞的侵袭能力。这种实验方式与研究巨噬细胞分泌的细胞因子对肺成纤维细胞的影响关系不大。如果需要研究巨噬细胞分泌的细胞因子对肺成纤维细胞的影响，建议使用共培养实验或者上下室隔离实验，这样可以更准确地模拟生理环境。

3.关于Beyotime的实验流程，可能因为不同的实验目的而有所不同，这里给出一般的实验流程供参考：

（1）制备培养基：按照Beyotime试剂盒说明书中的方法，制备适合实验的培养基。

（2）细胞处理：处理需要研究的巨噬细胞和肺成纤维细胞，包括细胞的培养、传代和处理等。

（3）实验分组：将细胞分成实验组和对照组，注意对照组要设计得合理。

（4）细胞共培养：将巨噬细胞和肺成纤维细胞共同培养，观察细胞因子对肺成纤维细胞的影响。

（5）样品采集：在共培养一定时间后，收集细胞和上清液，进行下一步的实验处理。

（6）实验分析：根据研究目的，选择适合的实验方法进行分析，例如Western blot、ELISA、实时荧光定量PCR等。

以上是一般的实验流程，具体实验方法和流程还需根据实验目的和实验设计进行优化和调整。

需要把巨噬细胞和肺成纤维细胞放在上室共同培养。