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实验问答

24,972,861 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问求助！！！请问各位大神多发性骨髓瘤细胞都是怎么养的！！

龙大人驾到

多发性骨髓瘤细胞培养需要选择合适的培养基，如人多发性骨髓瘤细胞专用培养基。一般来说，15%的血清对于多发性骨髓瘤细胞的生长可能不够，建议使用20%的血清。MM1S和8226细胞株都是悬浮生长的细胞，传代时需要注意细胞密度和离心条件。

3 回答599 围观

问小鼠垫料

sswei

按一只笼子100g左右的比例放。

3 回答1938 围观

问慢病毒转导之后传代问题

sswei

首先，确定病毒是否有支原体或细菌污染；其次，确定病毒感染MOI是否过高，梯度稀释后感染，寻找合适的MOI。同时考虑目的细胞可能比较敏感，更换其它细胞感染确定病毒是否有问题。病毒对某些敏感细胞有毒性可能是不可避免的。如果以上都排除后细胞状态仍然不好，尝试增加血清含量，观察细胞状态是否好转。

3 回答536 围观

问实时荧光定量PCR为什么模板浓度高了反而CT值增大了？

土井挞克树

可能是扩增效率低的原因，提高扩增效率

4 回答1145 围观

问做qPCR时阴性对照水中一直有扩增子是怎么回事

loveliufudan

有几种可能的原因：污染：可能存在污染，即DNA或RNA在实验室环境中存在，进入了试剂或反应体系中。这种情况可能是由于实验室的DNA或RNA污染引起的，或者可能是由于PCR试剂或其他反应组分中存在的污染引起的。在这种情况下，应该检查实验室中所有试剂和反应组分，以查找可能的污染源。假阳性：假阳性是指在PCR反应中出现了扩增信号，但实际上并不存在目标分子。这种情况可能是由于反应物的特异性问题引起的。在这

5 回答743 围观

问标尺到底是什么意思？加标尺的标准是什么?如果没有一张加好标尺的标准图片，那我的图片该怎么加标尺呢？

土井挞克树

标尺是一个参考，可以直观的提供样本的计量数据

3 回答1425 围观

问abcam的抗体说明书上观察到的分子量是33，我跑的都在42，文献里别人用sigma或者其他抗体条带也在42，我跑的能不能用啊？呢

loveliufudan

抗体说明书中提到的分子量是供参考的，它是由厂家或供应商提供的建议值，可能会因为生产批次或其他因素而略有不同。因此，在实验中，您应该以您的实验结果为准，而不是仅依赖于说明书提供的参考值。在您的实验中，您得到的蛋白质大小为42 kDa，而在其他人的实验中，他们使用的抗体或其他试剂得到的蛋白质大小也为42 kDa。这表明您的实验结果与其他人的实验结果一致，并且与文献报道的结果相符合。因此，您可以使用您的

3 回答471 围观

问求问大神角膜上皮细胞怎么提取，培养？

土井挞克树

培养基：无血清角质形成细胞培养液，添加0.15mmol/L 钙、0.1ng/ml 人上皮生长因子、5mg/ml 胰岛素、0.5mg/ml 氢化可的松和30mg/ml 牛垂体提取物；MEM；PBSA；胎牛血清

3 回答915 围观

问降解TLR4实验所用的LPS刺激时长大家都是多久？然后孵育PROTAC时长又是多久？

土井挞克树

lps一般的刺激时长为3-5h。

3 回答1669 围观

问血清替代物支原体qPCR检测样本的最低检测限及样本前处理的具体操作？

loveliufudan

关于血清替代物支原体qPCR检测样本的最低检测限和样本前处理的具体操作，具体如下：最低检测限最低检测限可以因实验所使用的qPCR反应体系、检测靶标和实验条件而异。通常来说，为了获得更高的灵敏度和特异性，建议使用高纯度的核酸提取方法和qPCR试剂盒，以及进行多次重复检测。一些文献报道了在使用血清替代物时检测支原体的最低检测限为10^3到10^4个基因拷贝数/毫升。样本前处理在使用血清替代物处理样本前

3 回答545 围观

问 Graphpad prism 比较两组数据（两个样本）之间的显著性差异怎么比，wb条带明显有差异，但为什么试了一下没有差异性

菊与刀刀

显著性差异要有样本平均值才能比，每组一个样本比不了

4 回答4975 围观

问分子克隆测序都是载体的的序列？

土井挞克树

说明载体没连接或者载体脱离了，需要重新连接

4 回答801 围观

问关于Raw263.7巨噬细胞极化问题，加LPS后，如何判断诱导其向M1型极化成功了呢？

土井挞克树

需要加细胞因子，然后观察m1分泌蛋白的分泌情况判断

4 回答2665 围观

问WB蛋白在37到45范围内用哪个浓度的分离胶分离比较合适?

你猜猜乌鸦座

一般蛋白分子量在20-60kDa之间选12%的分离胶

6 回答1711 围观

问组织芯片做多重免疫荧光如何避免组织脱离?

土井挞克树

脱蜡前进行水化，可以防止组织脱离

3 回答665 围观

问多重免疫荧光为什么会飞片?

loveliufudan

造成多重免疫荧光飞片的原因有以下几个方面：治疗组织不当：在制备组织样本时，固定和处理组织的方法和条件可能会影响组织的完整性。如果组织未能充分固定或处理不当，组织结构会受到破坏，导致组织容易脱落。贴片不当：在贴片时，如果载玻片上的组织样本未能均匀涂布或压实，样本就会容易脱落。此外，如果载玻片表面存在污染或未经适当处理，组织样本的附着力也会受到影响。洗涤和染色条件不当：在染色和洗涤过程中，如果使用过于

3 回答566 围观

问感受态细胞转化时，热激时间可以引导入的DNA大小进行调整么？还是在60秒到90秒就可以

龙大人驾到

感受态细胞转化时，热冲击的时间是非常重要的，它能影响DNA片段的渗透和稳定性，从而影响到细胞转化效率。一般来说，热冲击的时间应该在60秒至90秒之间。这个时间范围内，热冲击可以促进DNA片段的进入细胞，但如果时间过久，则有可能导致DNA片段的降解和稳定性下降，从而对细胞转化效率造成不良影响。此外，DNA的大小也会影响细胞转化效率，较小的DNA片段通常比较容易进入细胞并被稳定地表达。因此，在进行感受

6 回答3044 围观

问WB实验做出来pERK比ERK高，且两者水平变化相一致，内参是齐的，是什么原因呢

土井挞克树

因为pERK的抗体结合力特别高，totalERK的结合力很低。

4 回答920 围观

问免疫组化标本突然大量脱片

沫子大大

大量脱片问题考虑你的试剂浓度是否合适，同时你的载玻片有没有问题，普通的载玻片需要度明胶，也可以直接买黏附性的载玻片，贴的时候不要弄反。

5 回答817 围观

问说明书上说一抗孵育可以是37度2小时，也可以采用4度过夜，那我到底应该采用哪种方法呢？

沫子大大

其实这两种方案我都试过，差异性不是很大。但我染的是小胶质细胞，你的具体情况不了解，你可以根据你的时间安排，算是当做摸条件，但结果差异性应该不是很大。

4 回答3823 围观

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