实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问请问这种泳道内部背景很黑是啥原因呢？跑了好几次都这样😭抗体是新配制的，用的是半干转20伏28分钟

sswei

背景黑可能有以下几个原因:1.没有封闭好,但这个可能很小2.一抗浓度太高,适当降低增加一抗稀释比例3.二抗孵育时间太长,一般室温45min,二抗切不可孵育时间太长

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问关于IG转录的一些转录因子有哪些？作用是什么？

土井挞克树

给你分享一张图片，上面有转录因子及作用

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问IG的V（D）J模式是跟基因重排相关吗，原理是什么？

土井挞克树

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问热蛋白组学实验裂解细胞，可以用Rapigest SF吗？

土井挞克树

裂解剂一般还是要选择NP-40，Rapigest SF注意作用是表面活性剂，增强表面活性

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问序列正中间有个polyA尾会影响PCR扩增嘛

土井挞克树

可以分段扩增，把polyA的位置固定在尾侧

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问提质粒时最后一步加Elution Buffer洗脱，如果没加好加到壁上导致最后的质粒少，会有什么影响吗？可以在离心前多加EB吗？

loveliufudan

如果在提取质粒时未将Elution Buffer彻底加入壁上，可能会导致一些未被溶解的DNA残留在壁上，从而导致纯化后的质粒DNA量减少。在离心前添加更多的Elution Buffer可能会有所帮助，但是需要注意的是，如果添加过多的Elution Buffer可能会导致质粒DNA的浓度过低，从而影响后续实验的结果。因此，建议在离心前仅添加足够的Elution Buffer以确保所有DNA都被溶解并

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问一段rDNA介导的外源基因整合到酵母基因组可以重复多次整合基因吗

土井挞克树

可以的，但是随着整合次数的增多，整合的成功率就会降低。

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问药品的防霉实验怎么做

土井挞克树

孢子悬液可以直接接种在PDA平板上实验

3 回答314 围观

问小鼠免疫相关问题求教

洛噜啦噜啦嘞

首先，细胞免疫效果取决于抗原。正常情况下皮下接种，背部皮下即可。接种成功，其实，我们看的是一段时间之后，接种位置处是否出现溃烂，即表明有炎症产生，当然，并不是所有的免疫接种都会出现这种情况。

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问水痘减毒活疫苗病毒裂解的相关问题

土井挞克树

增加裂解液Triton X-100 的浓度

3 回答336 围观

问免疫组化病理切片扫描后可以使用image J软件可以一次性计算整个切片光密度值吗，如何计算，有什么规范吗？

土井挞克树

免疫组化病理切片扫描后可以使用image J软件计算整个切片光密度值，但是不可以一次性，把image J扫描后进行光密度选择然后计算。

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问未灭菌大肠杆菌倒入下水道

土井挞克树

已经到了没有办法了，但是确实容易造成污染

3 回答236 围观

问免疫荧光双重标记问题？

土井挞克树

如果非特异性程度高的话，那一般出现双重标记的可能性比较低

3 回答467 围观

问细胞孵育完IgG抗体会影响后续加药吗

sswei

可能存在抗体不识別或抗体选择错误等情况。

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问免疫荧光问题求助细胞显微镜观察

土井挞克树

可能是你应该非特异性结合的部分太多了。

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问为什么毕赤酵母诱导蛋白的酶液有酶活没有蛋白条带？

loveliufudan

毕赤酵母诱导蛋白的酶液有酶活但没有蛋白条带可能有以下几个原因：1.蛋白质表达量很低：在SDS-PAGE分离蛋白质的过程中，如果表达量很低，可能无法检测到蛋白条带。2.蛋白质在毕赤酵母中表达不稳定：毕赤酵母中的表达系统和真核生物不同，蛋白质的表达往往是暂时的、非常短暂的。如果蛋白质表达不稳定，可能在采集样品的过程中已经被降解或丢失。3.蛋白质被部分降解或结构发生改变：蛋白质在毕赤酵母中表达时，可能会

3 回答516 围观

问求问各位大佬图中这种糊糊状的东西是什么原因造成的，图一是前两天拍的，图二今天细胞已经死掉了

蓝莓小布丁

有可能是细菌污染从而影响细胞的生存，建议细胞实验严格控制灭菌。

3 回答258 围观

问做免疫荧光时用到的免疫电镜的相关问题？

sswei

是为了更好地观测到DNA分子的超微结构。

3 回答329 围观

问请问纯化得到表达的VLPs要做透射电镜观察，铜网，应该准备哪些材料，方法步骤，小白第一次做电镜

loveliufudan

以下是纯化表达的VLPs进行透射电镜观察的一般步骤：材料：纯化后的VLPs样品碳膜覆盖的铜网（200-300目）纯化水步骤：将铜网放置在纯化水中，轻轻地用镊子夹住铜网的边缘，在水面上晃动几次，使其上下浸润一下水，去除表面的杂质。用极少量的滴管吸取纯化后的VLPs样品，滴在铜网上，让其自然干燥。在干燥前，可以用滤纸轻轻地吸干铜网周围的水分。将样品处理后的铜网放入透射电镜中，进行观察。观察前要先对电镜

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问阳性样本FAM通道有值，VIC通道没出，是什么原因？

dxy_rnzkkoz9

把你的基线改一下呢，把1到15个循环拉直了再看。

4 回答1330 围观

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