实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问一个基因有三个转录变体，克隆基因时会对测序结果造成影响吗，影响克隆基因吗

huarenqiang5

一个基因有三个转录变体时可以用以下两种方法进行基因测序： 1.设计CDS引物，通过提取组织RNA，并设计相应引物，运用PCR的方法获得目的基因CDS序列，连接到克隆载体后，挑取单克隆进行测序。这种方法相对成本较低，但是PCR过程可能引入突变。适合基因CDS序列较短的情况。 2.全基因合成：根据目的基因的CDS序列，直接交给公司设计合成目的基因。此方法优点准确

3 回答356 围观

问请问各位前辈，请问LY294002溶液如何配置呀,是先用DMSO配成母液然后再加吐温80，PEG300和水稀释吗？

huarenqiang5

先用100%DMSO溶解，然后用的时候1000倍稀释灌流。

4 回答651 围观

问RNA琼脂糖电泳四根条带?

huarenqiang5

从图片及操作综合分析考虑最后一根是降解产物。

4 回答3130 围观

问请问如果我的细胞需要经过刺激之后给药，那么在小室接种细胞时，这个细胞是给药和刺激完成后再接种到小室中

loveliufudan

这取决于你的实验设计和研究目的。如果你的目的是研究给药和刺激后细胞的生物学响应，那么你需要先刺激和给药，然后将细胞接种到小室中进行观察。如果你的目的是研究细胞在给定条件下的反应，那么你可以先将细胞接种到小室中，然后进行刺激和给药。在任何情况下，你需要注意细胞的状态和实验条件，以保证实验结果的可靠性。

4 回答214 围观

问请问同一个逆转录试剂盒能够既做小鼠RNA的逆转录又做人类RNA的吗？

loveliufudan

一般情况下，同一个逆转录试剂盒可以用于逆转录不同来源的RNA，包括小鼠RNA和人类RNA。这是因为逆转录试剂盒中的逆转录酶通常是通用的，能够逆转录各种来源的RNA。然而，对于某些特殊的RNA，如长RNA、短RNA、mRNA等，可能需要特定的逆转录试剂盒才能更好地逆转录。此外，逆转录试剂盒的反应体系中也包含了其他辅助试剂，如缓冲液、酶切剂、核酸酶抑制剂等，这些试剂可能会对反应的特异性、效率和准确性产

4 回答305 围观

问苏木素复染过程中，如果染色不理想可以补救吗？怎么补救？

huarenqiang5

能够进行补救，染色深则分化时间稍长些即可；染色浅则再置于苏木素中染色即可。

4 回答984 围观

问实验过程中，切片上有一些空余的地方会非特异性吸附抗体，造成后续结果的假阳性，怎么才能避免这种情况？

huarenqiang5

进行封闭后然后再进行一抗孵育这样可以有效避免假阳性的发生。

5 回答217 围观

问实验过程中，石蜡切片染色过程中总是出现脱片现象，怎么有效避免？

huarenqiang5

一般来说，如果用多聚赖氨酸包被过的片子做正常免疫组织化学染色的话是不会掉片子的。但如果要做抗原修复的话，如果片子处理不好的话是有可能掉片子的。可以试试一下的方法：a.我们一般用APES：丙酮=1:50的处理液来处理片子，处理5min左右，然后水洗，烘干既可用于贴片。如果把水滴再处理好的片子上，水比较聚的话说明片子处理的好。b.贴片子的时候，展片的时间要把握好，不要太长，否则不利于贴牢。c.烤片子也

6 回答1875 围观

问想问一下懂行的大佬，最近在用crisper cas9做基因的片段敲除，敲的是一株产油酵母里的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因。

huarenqiang5

敲除效率受多方面因素影响，建议从以下几点考虑： 1.基因敲除靶点应设计在起始密码子附近（包括起始密码子）或者起始密码子下游的外显子范围内。 2.不同靶点在基因敲除效率上有较大差异，因此同时设计构建 2～3 个靶点的基因敲除载体再从中选出敲减效果较佳的靶点。 3.N1-N20NGG 靠近 PAM 的碱基对靶点的特异性很重要，前 7～12 个碱基的错配对 Cas

3 回答543 围观

问蛋白对接Zdock中蛋白过大问题

huarenqiang5

蛋白大分子按以下步骤进行预处理：1 在执行vina分子对接过程中，主要的预处理软件事Autodock tools这个软件，前面我们已经介绍过其安装过程，首先打开这个软件；2 应用该软件打开已经准备好的蛋白分子，注意要放在我们指定的文件夹中；3 对该蛋白分子进行加氢反应；4 选择所有的氢原子，点击OK；5 计算蛋白得电荷；6 然后将蛋白保存为PDB格式就好，这个蛋白分子是已经加氢完毕；7 可以直接替

3 回答2255 围观

问免疫荧光PB浓度问题求助？

huarenqiang5

切片染色清洗时PB浓度建议用0.01的更好。

4 回答400 围观

问microrna载体构建

loveliufudan

miRNA的前体是一段长链RNA，通常会被Drosha核酸酶和Dicer核酸酶剪切成成熟的miRNA分子。在构建miRNA过表达载体时，需要将miRNA的前体序列插入到适当的载体中，以实现高水平的miRNA表达。在设计前体引物时，需要遵循以下原则：引物长度：miRNA的前体长度一般在100到300nt之间，因此前体引物的长度应该在200到500bp之间，以确保充分覆盖前体序列。引物序列：在设计前体

2 回答906 围观

问cat酶活性计算问题

huarenqiang5

是的，是每个样品的最后一分钟吸光度，建议多次几次然后取平均值这样结果更精准。

3 回答737 围观

问为什么所有试剂和检测样本要平衡至室温后再进行加样操作

huarenqiang5

因为这样试剂和检测样本的稳定性好，利于实验，使实验结果更精准。

4 回答312 围观

问用FITC和用Cy3标记的二抗除了在颜色上有区分外，其他方面还有区别吗？比如说特异性和敏感性方面。

huarenqiang5

FITC和Cy3各自标记的二抗主要是在颜色上区别较大，而在特异性和敏感性没有大的区别。

3 回答611 围观

问免疫组化检测时，如何控制显色背景？

huarenqiang5

1、每一步一定要充分清洗，做细胞培养片子时，要避免冲洗液直接冲到细胞上，以防将细胞冲走。2、控制好DAB染色时间，最好在显微镜下控制时间，在我们的实验过程中，发现DAB染色时间与书上描写的（要求5-15分钟）差异很大，一般120秒就开始变色，时间过长将出现明显的假阳性结果。3、一抗的浓度不能太高,否则会竞争性拮抗.但也不能太低,每次冲洗要把水吸干,否则会人为地降低浓度。4、一抗如果是单抗的话，建议

3 回答501 围观

问请问如何对双组分系统中的反应调节蛋白上的Asp进行体外磷酸化？

sswei

根据磷酸氨基酸残基的不同，磷酸化蛋白可分为4类：O-磷酸蛋白、N-磷酸蛋白、酰基磷酸蛋白和S-磷酸蛋白。蛋白质磷酸化的研究方法最广泛使用的技术是Western-blot，质谱和同位素标记结合免疫印迹-化学发光分析，Phos-tagTM SDS-PAGE。

3 回答363 围观

问细胞程序性死亡与调节性死亡的区别

sswei

细胞程序性死亡（programmed cell death，PCD）是一种基因指导的细胞自我消亡方式。P程序性细胞死亡的亚型包括细胞凋亡、自噬和坏死性凋亡。调节性细胞死亡涉及效应分子参与的信号级联反应，具有独特的生化特征、形态特征和免疫学后果；其中发生在生理条件下的调节性细胞死亡也被称为程序性细胞死亡(PCD)

3 回答3113 围观

问请问诱导用的IL-4是人源的还是鼠源的？

huarenqiang5

诱导用的IL-4人源和鼠源的都可以。自己可以根据实验目的和要求进行选择。

5 回答1012 围观

问想请教一下用线虫测过抗氧化相关试剂盒的大佬,你们测定时是怎样取样本进行测定的,是直接将虫子收集超声破碎后取上清进行测定的吗？

晴空a

用组织捣碎机 10000～15000 转/分上下研磨制成 10%组织匀浆。将制备好的 10%匀浆液用普通离心机或低温低速离心机 4000 转/分左右,离心 10～15 分钟，取上清液进行测定。

4 回答644 围观

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