实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

问MMF吗替麦考酚酯-裸鼠实验溶药问题

loveliufudan

MMF)是一种免疫抑制剂，通常用于器官移植等情况下预防排斥反应。在动物实验中，MMF也可以用于抑制免疫反应。关于MMF的溶解方法，可以参考以下步骤：将MMF取出并称取所需的药物量。将MMF加入适量的无水二甲基亚砜(DMSO)中，并用磁力搅拌器搅拌至药物完全溶解。将溶液加入适量的生理盐水中，使浓度达到所需的浓度，搅拌均匀。需要注意的是，MMF在DMSO中的溶解度较高，因此在加入生理盐水时需要进行稀释

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问求助 Ⅰ 输血相关急性肺损伤大鼠造模麻醉选择

loveliufudan

在动物实验中，选择合适的麻醉剂是非常重要的，不仅要考虑到药物的效果和安全性，还需要考虑到伦理、法律等方面的问题。水合氯醛是一种常用的麻醉剂，但在一些国家和地区，使用它可能存在伦理上的问题，需要注意。异丙嗪是一种常用的气麻药，但也需要考虑到其副作用和风险。如果您选择使用异丙嗪，需要掌握其用药剂量和注意事项，以确保动物的安全和福利。戊巴比妥钠是一种常用的静脉麻醉剂，用于大鼠的腹腔注射。但由于其为麻醉剂

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问试验求助

loveliufudan

了解胚胎转录活性和抑制活性后的发育区间，可以使用以下方法：单细胞RNA测序单细胞RNA测序可以揭示胚胎早期转录组动态变化。可以对不同发育阶段的胚胎进行单细胞RNA测序，并对得到的数据进行分析，了解基因表达变化及差异。通过对转录组数据进行比较分析，可以确定胚胎发育的不同阶段。全胚转录组分析可以对全胚进行转录组分析，确定胚胎发育的关键基因和通路，进一步研究胚胎发育的调控机制。荧光原位杂交荧光原位杂交可

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问Western

loveliufudan

Western blot分析中出现背景干扰和非特异性条带通常是由以下几个原因引起的：细胞裂解不充分：如果没有彻底裂解细胞，残留的细胞组分可能会与检测目标交叉反应，导致非特异性条带和背景信号增强。靶蛋白含量过低：如果目标蛋白含量太低，可能无法被充分检测到，从而导致非特异性条带和背景信号增强。抗体特异性不佳：如果使用的抗体与非特异性结构类似的蛋白结合，可能会引起交叉反应，导致非特异性条带和背景信号增强

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问大鼠尾静脉取血检测胰岛素

loveliufudan

进行大鼠尾静脉取血检测胰岛素时，一般需要抽取一定量的血液才能进行检测。通常，抽取的血液量应该是大鼠体重的1%-3%，也就是说，对于体重为200-300g的大鼠，每次取血量应该在2-6mL之间。需要注意的是，在进行尾静脉取血时，应该采取正确的操作步骤和方法，以避免对大鼠造成不必要的伤害。同时，也应该注意血样采集的时间，以避免影响胰岛素的测定结果。在进行胰岛素的ELISA检测时，需要使用专门的胰岛素试

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问WB的上样浓度

loveliufudan

一般来说，上样浓度应该根据样品浓度、希望检测的蛋白质浓度和电泳系统的灵敏度来确定。上样浓度过高会导致样品堆积和条带模糊，而上样浓度过低会导致信号弱。通常情况下，建议将上样浓度设置在1-4之间。在优化实验时，可以使用不同的上样浓度进行试验，并比较结果，选择最佳的上样浓度。此外，还可以尝试调整其他实验条件，例如运行时间、电泳缓冲液pH值、电压等，以获得最佳的结果。

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问Dkk1

sswei

DKK1是Wnt/β－catenin信号通路的可溶性抑制剂，它在骨骼发育和骨代谢的过程中都发挥着至关重要的作用。

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问泛素化酶

loveliufudan

确定泛素化的底物靶蛋白后，找到对应的 E1、E2 和 E3 酶通常需要进行以下步骤：文献调研：首先，需要通过查阅相关的文献资料，了解泛素化底物靶蛋白的泛素化机制。文献中通常会提到用于底物靶蛋白泛素化的 E1、E2 和 E3 酶。数据库搜索：在确定了 E1、E2 和 E3 酶的可能性后，可以利用生物信息学数据库如UniProt、NCBI等进行搜索，查找这些蛋白质的基本信息、功能描述和相互作用网络等。

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问金葡菌摇菌

loveliufudan

这种情况可能是因为耐药菌的数量非常少，以至于即使加入抗生素，也无法完全抑制其生长。此外，如果您之前的菌种保存时间太久，也有可能会导致菌种的数量和活力降低。建议您可以尝试使用更高浓度的抗生素来筛选耐药菌，或者选择其他耐药菌株进行筛选。另外，您可以尝试使用更加灵敏的检测方法来检测耐药菌的存在，例如PCR或基因测序。

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问多克隆抗体制备，免疫兔子

loveliufudan

通常情况下，不建议直接将含有高浓度尿素的蛋白用于动物免疫免疫，因为高浓度尿素会对动物产生毒性影响，可能会导致免疫反应异常或不良反应。同时，尿素也可能与蛋白质结合，影响蛋白的二级、三级结构和免疫原性。为了克服这些问题，可以采用以下两种方法：尝试将蛋白在含有较低浓度尿素的缓冲液中进行重折叠和重组，以使其回复到天然构象并增强免疫原性。在纯化过程中，可以逐渐降低尿素浓度，并将其转移到合适的缓冲液中，最终得

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问荧光信号问题

loveliufudan

在核酸检测中，实验组加入了DNA模板，而空白组中只有用水代替模板，因此实验组应该会有更多的靶分子（模板）可供引物探针与之匹配，从而发生聚合酶链式反应 (PCR)。这会导致实验组反应体系中产生更多的荧光信号，因为PCR产物与探针发生结合后荧光染料被激活，发出荧光信号。相比之下，空白组中没有模板的存在，PCR反应几乎不会发生，因此会产生很少的荧光信号。此外，空白组中可能会存在背景噪音或杂质信号，但这些

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问竞争法胶体金，不消线

土井挞克树

不消线可能是因为过量的蛋白可能会封闭某些结合位点，建议换用其他的封闭方式，作对比试验

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问肿瘤干细胞传代

loveliufudan

传代和扩培肿瘤球（tumor spheres）的方法可以因实验目的、肿瘤类型和细胞培养条件等而异，但以下是一般的操作步骤：用PBS或无酶胰消化液将肿瘤球收集起来，放到50 ml离心管中，然后离心洗涤2-3次，去除细胞碎片和培养基残留物。将肿瘤球重悬于新的培养基（如肿瘤球培养基、serum-free medium等），一般是将每个肿瘤球接种到新的96孔或24孔培养板中。等待肿瘤球重新附着和生长。通常

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问SMD1168和GS115感受态从-80拿出来在冰上化了半个小时，怎么看是否

loveliufudan

在半个小时的冰上解冻之后，如果上层已经稍微澄清，这可能意味着感受态已经成功地被解开。但是，如果下层仍然是白色浑浊的，这可能意味着它们还没有完全解开。在这种情况下，您可以轻轻地摇晃样品管，以帮助混合液体并促进解开。如果您想进一步确认细胞悬液是否已经成功地解开成为可测量的液态状态，您可以尝试进行进一步的实验，例如使用比色法或荧光检测法检测其蛋白质含量或活性等指标。

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问质粒电转到毕赤酵母感受态后，涂板，长出菌后，做菌落pcr怎么做

loveliufudan

可以尝试用快速菌落PCR的方法来提取和扩增酵母菌的质粒DNA。具体步骤如下：用菌落PCR提取酵母菌的质粒DNA，具体步骤如下：选取酵母菌菌落，用无菌的PCR管刮下一小块菌落。加入10-20 μL TE缓冲液（pH8.0）或蒸馏水，用微量吸管或者细管破碎菌落。加入 1 μL 蛋白酶K，37℃ 孵育5-10 分钟。注意不要过度消化。将管子放入100℃的水浴中，热搅拌10分钟使细胞裂解，然后放到冰上冷却

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问厌氧菌培养

loveliufudan

脆弱拟杆菌的生长速度通常比较慢，而且需要特定的培养条件，如营养丰富的培养基、适宜的温度和氧气含量等。你可以检查一下你所使用的培养基和培养条件是否适合脆弱拟杆菌的生长。另外，从干粉活化后，需要先进行预培养来逐步适应液态培养基中的环境，再转移到固体培养基上生长。你可以尝试将脆弱拟杆菌在液态培养基中培养一段时间，再转移到固体培养基上进行观察。多形拟杆菌也是一种比较难培养的菌株，同样需要特定的培养条件。你

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问胶体金产品出现断点是什么情况

loveliufudan

断点是胶体金产品中常见的问题，可能是由多种因素引起的。以下是一些可能导致断点的因素：pH值：胶体金的稳定性受pH值影响较大，如果pH值偏高或偏低可能会导致断点。请确保使用的缓冲液的pH值适合胶体金产品的稳定性。盐浓度：高盐浓度会影响胶体金的稳定性，导致断点。请确保使用的缓冲液的盐浓度适合胶体金产品的稳定性。温度：胶体金对温度敏感，高温可能导致胶体金的稳定性下降，导致断点。请确保使用的试剂在适当的温

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问circbase ID转换

loveliufudan

可以使用以下方法：在circBase网站中使用“search by gene symbol”选项，输入GEO2R分析中的基因D，然后检索与该基因D相关的circRNA。在circBase网站的“search”页面中使用circRNA的基因名称进行搜索，并查找与GEO2R分析中得到的基因D相关的circRNA。如果以上两种方法都不起作用，可以使用BLAST（基于序列相似性的搜索工具）来搜索与GEO2

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问细胞衰老造模求助

loveliufudan

确定换液后继续培养细胞三四天的时间通常取决于需要进行的后续实验和文献报道中使用的实验时间。在许多实验中，细胞在双氧水处理后需要一定时间来表达衰老标志，并且这个时间通常是根据之前的研究经验和试验结果来确定的。因此，您可以参考相关文献中使用的实验时间，并适当进行优化和调整。对于控制组和衰老组的细胞密度，应该根据您的实验设计和所使用的细胞类型来确定。通常情况下，建议在铺板接种时对细胞进行稀释，以确保它们

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问基因ID转换

loveliufudan

这个编码格式看起来像是遗传学中的突变命名方式，其中包括了两个部分：基因名称和突变位置。下面是一个将这个编码转换为另一种命名方式的方法：首先，需要找到编码所对应的基因。这可以通过 ENSTO0000331920.6 中的 ENSTO 来确定，它是一个 Ensembl 基因 ID。你可以在 Ensembl 数据库中搜索该基因 ID，并找到它对应的 NCBI 基因 ID（例如：NCBI 基因 ID 为

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