实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问述评算综述吗？

sswei

综述是对文献资料的综合叙述，重点在“述”;科技述评除了对文献资料进行综合分析和叙述外，重点在于“评”。

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问【求助】RoB 2 for cross-over trials Excel表资源求助

loveliufudan

是的，对于Crossover trial，ROB 2.0也有相应的Excel表格，用于帮助评估试验的风险偏倚。您可以在Cochrane官网上找到这个Excel表格的下载链接。具体而言，您可以前往Cochrane Handbook for Systematic Reviews of Interventions的官网页面，找到ROB 2.0工具箱的下载链接。在下载页面中，您会看到两个Excel表格：一

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问泛素化检测的免疫共沉淀怎么看

loveliufudan

WT和CS是两种不同的样品，可能是不同条件下的实验组和对照组。IP代表免疫共沉淀实验，是用来检测蛋白质相互作用的一种方法。在这个实验中，V5-TRABID是用来“鱼”Flag-VPS34的。Lysate是细胞裂解液，代表实验样品。His-Ub可能是用来标记Ubiquitin的，Ubiquitin是一个重要的信号分子，它可以和目的蛋白发生共价结合，形成泛素化修饰。His可能是Histidine的缩写

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问富集分析要上条和下调分开去做吗？

loveliufudan

对于蛋白组学数据的分析，富集分析通常用于挖掘蛋白质的功能、通路等信息，以了解生物学过程的变化。关于是否需要将上调和下调的蛋白分开进行富集分析，其实这个问题没有一定的答案，需要根据具体情况而定。如果将上调和下调的蛋白分开进行富集分析，可以更准确地了解上调或下调的生物学过程和通路。但是，如果某个生物学过程或通路的上下调蛋白没有被完全覆盖到，那么就会导致这个生物学过程或通路被遗漏。相反，将所有蛋白质一起

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问9 kDa左右蛋白带GFP，可观察到绿色荧光，但GFP标签抗体WB检测不到重组蛋白，空载正常

loveliufudan

有几种可能导致您无法检测到GFP标签的重组蛋白：GFP标签没有正确地折叠成其活性构象。这可能会影响抗体的结合，使其无法检测到标记的蛋白。您可以尝试使用其他抗体或试剂，例如融合蛋白的亲和标签（如His标签）。GFP标签可能已被降解或裂解，导致无法被抗体检测。这可能会发生在特定的实验条件下，例如高温、酸碱度变化或重组蛋白在某些条件下长时间存储。您可以尝试优化您的实验条件或使用其他标签。您的抗体可能存在

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问做实验练练手，结果有点出人意料

loveliufudan

这种结果可能有以下几种可能的原因：过量染色：在染色过程中，过量的染料会与蛋白质结合，导致颜色过深。如果您在染色过程中使用了过多的染料，那么即使内参蛋白质的上样量最小，它仍然可能出现深色带。实验条件不一致：在进行蛋白质电泳实验时，很多因素都会影响结果，如电泳时间、电压、缓冲液pH值等。如果这些实验条件在不同的实验中存在差异，那么结果也会有所不同。仪器问题：蛋白质电泳实验需要使用一些特殊的仪器，如电泳

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问同源重组第一次交换后菌落pcr没有带为什么

loveliufudan

同源重组的第一次交换需要确保有足够的质粒模板和恰当的条件。如果PCR没有出现目标带，可能是以下原因之一：质粒模板的浓度不足。如果使用的质粒量太少，PCR扩增可能不足以产生足够的目标带。建议使用更高浓度的质粒模板，并在PCR反应中增加扩增周期数和/或使用更高灵敏度的PCR酶。PCR反应条件不恰当。PCR反应温度和时间以及PCR缓冲液成分可能影响PCR扩增结果。建议调整PCR反应条件，尝试更多的PCR

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问荧光定量pcr数据

loveliufudan

RQ（relative quantification）是相对定量分析中的一个指标，表示目标基因表达量与参考基因表达量的比值。RQmin和RQmax是RQ的最小值和最大值，通常用于评估相对定量结果的可靠性。关于RQmin和RQmax的计算方法，通常会根据实验的具体设计和分析策略而有所不同。但一般情况下，它们是根据样品的Ct值以及参考基因的表达稳定性指标（如ACtSD）计算得出的。下面是一种计算RQm

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问荧光定量NTC有峰值

sswei

反应体系组分（如，水）被污染：实验过程中，更换新的Mix或者水重复实验;标本间的交叉污染或产物污染：反应体系在超净工作台内配制，对实验室进行严格的区分，减少气溶胶污染；使用带滤芯的枪头。

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问引物设计

loveliufudan

设计pre-miRNA和pri-miRNA的引物需要注意以下几点：确定目标序列：首先需要确定目标miRNA的pre-miRNA或pri-miRNA的序列，可以通过基因组浏览器等工具获取。引物长度：通常选择长度为18-24bp的引物。Tm值：引物的Tm值需要在50-65摄氏度之间。特异性：引物需要具有较好的特异性，避免引物与非目标序列的杂交。引物设计软件：可以使用一些在线或离线的引物设计软件，例如P

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问请问大家，在提取软骨组织RNA时必须要加乙醚吗？有没有什么替代试剂？

loveliufudan

除了乙醚外，还有其他试剂可以用于去除脂质、蛋白质和其他杂质，例如酚/氯仿、三氯乙酸、异丙醇、硝基酚等。其中，酚/氯仿是一种常用的替代试剂，可以替代乙醚，用于软骨组织RNA的提取和纯化。酚/氯仿的使用方法和乙醚类似，但是其溶解力比乙醚弱，需要加入同等体积的等相酚/氯仿混合液进行萃取。总的来说，如果您担心乙醚的毒性和挥发性，可以考虑使用酚/氯仿等替代试剂进行软骨组织RNA的提取。但需要注意，不同的试剂

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问A549细胞转染

sswei

通常情况下，对于24孔板的DNA转染，每次用2μl左右，则1.5mlLipo2000约可转染750个孔；对于24孔板的siRNA转染，每次用1μl左右，则1.5mlLipo2000约可转染1500个孔。

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问如何考察核酸检测方法的灵敏度

loveliufudan

为了考察核酸检测方法的灵敏度，可以使用不同浓度的DNA或质粒来检测，并确定方法能够检测到的最低浓度。不同的基准可以用来考察不同类型的核酸检测方法的灵敏度。DNA浓度(m/v)：对于基于荧光染料或凝胶电泳的DNA检测方法，可以用不同浓度的DNA样品来检测，以确定方法能够检测到的最低DNA浓度。质粒拷贝数(copy/v)：对于基于PCR的检测方法，可以用含有不同拷贝数的质粒标准样品来检测，以确定方法能

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问双荧光素酶验证实验转染问题

loveliufudan

在进行双荧光素酶验证miRNA是否与靶基因的3UTP结合实验时，您可以选择将报告载体和miRNA模拟物分别配置两个体系进行转染，也可以将它们混合在一起加入转染试剂中。这取决于您的实验需求和转染试剂的使用说明。如果您选择将它们分别配置两个体系进行转染，可能需要更多的转染试剂，但是可以控制每个体系中报告载体和miRNA的比例，从而减少不必要的干扰。同时，这种方法也可以避免miRNA与转染试剂或其他物质

2 回答545 围观

问二次pcr

loveliufudan

可能有多种原因导致PCR产物暗或者模糊。以下是一些可能的原因和解决方法：反应条件不正确。确保PCR反应体系中的所有试剂品质良好，反应条件正确。如果反应体系中某些试剂的质量差，可以尝试使用新的试剂来重新制备反应体系，如果条件不正确，则可以调整反应温度、时间和引物浓度等参数。降解的DNA模板。如果模板的质量不好，例如DNA受到过度酶解、酸碱条件不佳等等，可能会导致PCR产物的低浓度或者失真。可以尝试使

3 回答1053 围观

问基因变异位点有RS号,但是未有文献报到过,算新变异吗?

sswei

通过对新变异位点结构、功能等情况进一步研究来说明。

3 回答394 围观

问二硫化物应激

sswei

由细胞内过量胱氨酸积累引起的二硫化物应激导致的快速死亡方式。

3 回答967 围观

问请问大家牛垂体提取物都用什么溶解啊

loveliufudan

牛垂体组织提取的溶解液可以根据不同实验需求选择。以下是一些常用的牛垂体提取液：RIPA缓冲液：含有1% NP-40、0.5% sodium deoxycholate、0.1% SDS、150 mM NaCl、50 mM Tris-HCl pH 8.0。该缓冲液适用于提取膜蛋白和可溶性蛋白，可以用于Western blot、免疫沉淀等实验。RIPA缓冲液含有高盐浓度：含有1% NP-40、0.5%

2 回答383 围观

问L-色氨酸如何加入LB培养基

sswei

色氨酸一般是在稀酸或稀碱溶液中溶解，然后加入培养基。

3 回答3717 围观

问中药入血成分内标物选择

sswei

在排除误差后，可选用该物做内标。

3 回答496 围观

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