实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问单抗类药物怎么保存？

医路顺风加油

运输过程应通过冷链运输，保持冷藏储存（2-8℃），注射器应保存在包装盒内，且不能冷冻。

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问请问wb实验要用到的脱脂奶粉有性价比比较高的牌子推荐吗？

断爱天堂

普通伊利蒙牛的袋装奶粉，一条一条的那种就可以

2 回答419 围观

问western blot实验中，两张膜裁成四部分，分别孵育不同的抗体，显影时两张膜条带一模一样？？

Sunmmmm

同样的抗原，不同的抗体，理论上条带不一样，膜只是模板，不同抗体识别位点不同

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问划痕实验为什么一划完边上细胞就变了？

医路顺风加油

应该第二天用200微升枪头比着6孔板盖子或直尺，平行或垂直于背后的横线划痕，枪头要垂直，不能倾斜；

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问WB电泳样品孔中加样量一般是多少，这是根据什么来设定的，过多或过少又会导致什么后果诶

百泰派克-李工

免疫印迹(Western Blot, WB)电泳中样品孔加样量的确定取决于几个因素，主要包括凝胶的尺寸、孔的容积、样品的浓度和所需检测的蛋白质的丰度。通常，加样量范围在10到30微升之间。如果加样量过多，可能会导致以下后果：1.样品溢出：样品可能会从一个孔溢出到相邻的孔，导致结果混淆。2.条带模糊：蛋白过载可能导致条带模糊不清，难以区分。3.影响分离效果：过多的样品可能会干扰蛋白的有效分离。如果加

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问各位老师，我目前已经用His标签纯化了目的蛋白A。做Co:Ip时，可不可以用myc标签纯化另一个蛋白，然后做co,ip实验？

百泰派克-李工

可以的。使用His标签纯化目的蛋白A之后，您完全可以使用Myc标签来纯化另一个蛋白，然后进行共免疫沉淀（Co-IP）实验。这种方法允许您特异性地识别和纯化两种不同的蛋白，从而使得Co-IP实验更加精确和可靠。在实验中，您可以用抗Myc抗体捕获Myc标签蛋白，然后检测是否有His标签的蛋白A与之相互作用。这种双重标签的方法增加了实验的特异性，有助于更准确地确定蛋白之间的相互作用。

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问蛋白组学检测到的差异蛋白为什么western blot检测不到？

百泰派克-李工

蛋白组学通过质谱等技术检测到的差异蛋白在Western Blot中检测不到可能有几个原因：1.检测灵敏度不同：质谱等蛋白组学方法通常比Western Blot更敏感，能检测到低丰度的蛋白。2.靶蛋白特异性：Western Blot依赖特异性抗体识别目标蛋白，如果抗体对该蛋白的识别性不好或者抗体质量问题，可能导致检测不到。3.蛋白修饰和变体：某些蛋白在体内可能经过翻译后修饰或存在不同的剪接变体，这些

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问WB的泳道背景比较黑，接近灰色是为什么啊？

百泰派克-李工

Western blot泳道背景变黑或接近灰色通常是由于以下几个原因造成的：1.过度曝光：如果曝光时间太长，胶片或成像系统可能会捕捉到过多的信号，导致背景变暗。2.膜处理不当：在转移或阻断步骤中，如果膜处理不当，比如阻断不充分，可能会导致非特异性结合，使背景变暗。3.抗体浓度过高：主抗体或次抗体浓度过高也会增加背景信号。4.洗涤不充分：如果洗涤步骤不充分，残留的抗体或检测试剂可能会增加背景。解决这

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问小分子蛋白（10KD）WB实验电泳液中不加SDS，但是wb不就是依靠SDS聚丙烯凝胶电泳的吗？如果不加SDS，是用tris填平吗

百泰派克-李工

小分子蛋白（10KD）在进行Western Blot（WB）实验时，通常确实使用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）。SDS是一种表面活性剂，它的作用是使蛋白质变性并赋予蛋白质负电荷，使蛋白质按照大小进行分离。如果你在电泳过程中不加SDS，蛋白质将不会完全变性，这意味着蛋白质的电泳迁移不仅受到它们大小的影响，还受到它们的形状和电荷的影响。这种情况下通常使用的是非变性电泳，或称为天然电泳。在

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问wb目的条带连成一条，内参正常，可能原因

百泰派克-李工

如果您的 WB（Western Blot）目的条带连成一条，但内参正常，可能的原因包括：1.过度加载样本：如果您加载的目标蛋白质样本过多，它们的条带可能会连成一条，因此请确保加载适量的样本。2.抗体亲和力过强或浓度过高：使用的一抗或二抗过于亲和或浓度设置得过高，导致过度染色。3.过度迁移时间：迁移时间过长可能会导致条带的扩散和连成一条，因此请确保迁移时间适当。4.蛋白质浓度不均匀：如果样本中的目标

4 回答1286 围观

问Frontiers 在 Independent Review阶段有2个审稿人已完成，但是没有是否通过

_Bingo_

请问在IR阶段只有一个review is ongoing是指只有一个审稿人吗但是客服告诉我有两个审稿人

5 回答10813 围观

问求各位大佬指点PCPA大鼠失眠模型

dxy_wbfhbox6

我也要做这个实验问一下楼楼有用到戊巴比妥钠嘛。我查文献看到有用戊巴比妥钠延长睡眠实验来判定造模是否成功。想和楼楼交流一下

4 回答1675 围观

问细胞单克隆，有限稀释法铺完96孔板后，3-4天细胞就全部死亡，什么原因？

土井挞克树

检查一下培养时间，和培养环境。死亡大概率是环境问题。

6 回答1653 围观

问中国公共卫生管理杂志

土井挞克树

还可以，杂志含金量不错，难度不太大。可以投

5 回答227 围观

问ros流式检测

yibufinn123

请问有双峰的Ros流式图，结果可用吗？放论文里可以嘛？这个现象挺常见的

3 回答1560 围观

问LC3 western的条件！！！

bamboopiggy

用15%的胶，不能全部下去，在大概中间偏下的位置就可以了，别非要跑到胶的底部。转膜的条件没有问题，我用的是abclonal的抗体，两条带都能出来。

4 回答948 围观

问求助｜3T3-L1脂肪细胞换液频繁

口腔种植2yy

请问同学，你现在找到解决方案了吗？

5 回答833 围观

问Eye杂志审稿状态

josemia

亲，请问后续是什么结果啊，我也是under consideration 1个多月了

2 回答1084 围观

问PCR体系中的Mg2+有什么作用？

dxy_1lrncmke

Taq DNA聚合酶进行热激活。

5 回答13374 围观

问严格厌氧菌的生长曲线测定

Eason老歌迷

三个标样平行试验的相对偏差应小于0.25%如果平行样相差大，那么你就得重新再做平行实验。是不是你没有摇匀呢?或者就是你吸样的时候没有操作好。

4 回答1997 围观

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