• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购

        求 小鼠淋巴管内皮细胞提取方法

        相关实验:淋巴细胞的分离

        user-title

        顺利13

        新人提取小鼠淋巴管内皮细胞半年了 一直未成功,求有经验的前辈分享经验,谢谢!

        wx-share
        分享

        3 个回答

        user-title

        一只乖刺猬

        有帮助

        请问楼主最后找到原代提取方法了吗!谢谢!

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        1. 处死动物后,打开胸腔,分离胸导管,在胸导管上端结扎,切取10-15cm的一段。将胸导管放入预冷PBS中漂洗。

        2. 在解剖显微镜下,用眼科剪和眼科镊剥除外膜的脂肪和纤维组织,然后用PBS反复冲洗管腔。

        3. 将胸导管移入含PBS的大培养皿中,清洗3次。在胸导管的远端插入静脉留置针,并结扎固定。用PBS冲洗管腔后,将游离端结扎。用静脉留置针向管腔内注入消化液,至淋巴管充盈为止。在37℃条件下,消化10min。淋巴管的管壁较薄,灌注消化时间不宜过长,以免消化过度,引起成纤维细胞的污染。

        4. 取出胸导管,在游离端剪一小口,用离心管收集消化液,然后用培养液冲洗管腔,收集消化液和冲洗液,以1000r/min,离心10min。离心后吸去上清液,用培养液轻轻混悬细胞。

        5. 将细胞接种于培养皿或培养板中,培养24h后补充培养液,继续培养。每隔2-3d换液1次。换液时,吸去1/2-2/3培养液,再加入新鲜培养液。

        6. 原代培养4-6h后,大部分细胞已贴壁生长。24h后,内皮细胞形成由数个细胞组成的细胞群。淋巴管内皮细胞的活性较低,原代培养时细胞生长缓慢。2-3周后,细胞生长形成单层。淋巴管内皮单层呈卵石状特征性排列,可传代培养。

        user-title

        huarenqiang5

        有帮助

        小鼠淋巴管内皮细胞:

        1. 取出25cm2培养瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜,以稳定细胞状态。

        2.待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。

        3.细胞传代

        1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次:

        2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液约1mL至培养瓶中,37℃温浴3min左右;倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后吸弃消化液,再加入完全培养液终上消化;

        3) 用吸管轻轻吹打混匀,按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代,然后补充新鲜的完全培养基至5mL,放入37℃,5%COz细胞培养箱中培养;

        4)待细胞完全贴壁后,培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。

        小鼠淋巴管内皮细胞注意事项:

        1、培养基于4℃条件下可保存3-6个月

        2、在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作

        3、传代培养过程中,胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁及其生长状态

        4、该细胞只可用于科研

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序