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        肺炎链球菌感受态细胞用这么方法制备啊,求解答

        相关实验:基因克隆:高效感受态细胞制作

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        666yyyy


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        1 个回答

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        凌晨三点Dxy

        有帮助

        肺炎链球菌感受态细胞的制备是一个专业且精细的实验操作过程,通常涉及以下几个关键步骤:


        1. **细菌的培养*:首先,需要从-70℃的冰柜中取出冻存的肺炎链球菌菌株,然后在超净工作台上用无菌操作将菌株接种到LB固体培养基上,进行活化培养。


        2. **单菌落的挑选*:从活化的菌落中挑选单个菌落,接种到液体培养基中进行培养。


        3. **培养至适宜密度*:将细菌培养至对数生长期,通常OD600(光学密度在600纳米波长)值达到0.3至0.5之间。


        4. **低温处理*:将培养好的细菌在低温(如0℃)下处理,这通常涉及将细菌悬液置于冰上一段时间。


        5. **CaCl2处理*:使用经预冷的低渗氯化钙溶液(CaCl2)处理细菌,使细胞膜发生变化,从而获得感受态细胞。


        6. **热激*:将处理过的细菌进行短暂的热激处理(如42℃水浴中热击90秒),这有助于细胞吸收外源DNA。


        7. **转化*:在热激后迅速将细胞置于冰上冷却,然后加入外源DNA,并在非选择性培养基中恢复一段时间,以允许细胞表达质粒编码的抗生素抗性基因。


        8. **筛选*:将转化后的细胞涂布在选择性培养基上,筛选出带有外源DNA的阳性克隆。


        9. **保存*:制备好的感受态细胞可以分装后储存在-70℃的条件下,以备后续实验使用。


        在实际操作中,可能还会使用特定的试剂盒(如Competent Cell Preparation Kit)来简化和标准化制备过程,以提高转化效率和实验的可重复性。此外,实验中应注意避免细菌的过度传代和污染,确保使用的试剂和器材的清洁度,以及严格控制实验条件,如温度和时间等。


        以上步骤综合了网上搜索结果中得到的信息,具体操作时应参照最新的实验指南或相关文献,并在专业实验室环境中进行。

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