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关于单细胞测序数据分析
loveliufudan
对于单细胞测序数据,进行质控的步骤通常包括以下几个方面:去除低质量细胞:根据细胞的RNA质量、UMI数量等指标去除低质量细胞,以保证后续的分析质量。过滤低表达基因:根据不同数据集的表达水平和目标分析,设定表达阈值,过滤掉低表达的基因,以降低噪音的影响。校正批次效应:校正不同批次、实验或平台之间的表达量差异,以提高分析的可靠性。去除PCR扩增倍数过高的细胞:对于单细胞测序,由于PCR扩增,可能导致同
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问
单细胞样品制备无法避免细胞粘连
loveliufudan
如果难以彻底将细胞吹散,可以考虑采用其他细胞分离的方法,如机械剪切或酶消化等。此外,为了获得特定类型细胞的测序结果,可以采用细胞分选技术。以下是一些常用的细胞分选方法:流式细胞术:使用细胞表面标记分选目标细胞。磁性细胞分选法:使用与目标细胞表面标记结合的磁珠进行分选。微流控芯片:通过微流控芯片中的结构和流体调控,实现目标细胞的分选。免疫磁珠分选:使用特异性抗体结合目标细胞表面标记,然后使用磁珠分选
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问
第一次要自己设计实验 想请问有没有人做过金纳米颗粒 PCR ?是否有详细的步骤能参考?
loveliufudan
金纳米颗粒PCR(Gold Nanoparticle PCR)是一种利用金纳米颗粒作为PCR信号放大的探针,其灵敏度高于传统PCR。下面是一些步骤和建议,供您参考:1.准备PCR反应体系:根据实验需要,制备PCR反应体系,通常包括PCR引物、dNTP、Taq聚合酶、MgCl2和PCR缓冲液等。可根据实验需要,将金纳米颗粒直接加入PCR反应体系中,或使用金纳米颗粒探针。2.制备金纳米颗粒探针:金纳米
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问
提取RNA用的真菌培养过长时间会有什么影响吗?
loveliufudan
长时间的培养可能会对RNA的质量产生影响,导致RNA降解、破裂、变性或者受到其他形式的损伤,从而影响RNA的纯度和完整性。对于曲霉菌这类真菌,其RNA在培养过程中也可能会被分泌酶或细胞外酶降解,进一步影响RNA的质量。因此,如果要提取RNA,最好是在菌细胞处于最佳生长状态时进行,一般是在菌落刚刚形成或在对数生长期进行提取。对于您目前培养了10天的曲霉菌,可以先进行RNA提取,但需要注意RNA的纯度
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问
定量PCR二次扩增GAPDH出现拖影
loveliufudan
定量PCR二次扩增GAPDH出现拖影可能会影响结果的准确性,建议排除掉拖影问题后再进行数据分析。拖影一般是由于PCR反应过程中,引物结合到非特异性模板上扩增所导致的。这种非特异性扩增可能是由于PCR反应条件不恰当或引物设计不合理所导致的。以下是一些可能导致PCR反应中出现拖影的原因和解决方法:PCR反应条件不恰当:PCR反应温度过低或时间过长,会导致扩增产物不特异性地结合到非特定的模板上,从而导致
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问
荧光定量的曲线是这样的,是不是证明这个引物不特异呀
loveliufudan
可能是引物不特异,但也有其他可能的原因。以下是一些可能导致PCR曲线出现此类现象的原因:引物设计不合理:引物设计可能存在一些问题,如引物长度、序列不合适等,会导致引物与非特定模板结合并扩增,从而导致此结果。模板DNA存在杂质:模板DNA存在杂质可能会导致PCR反应出现此类现象。例如,存在其他DNA片段或残留的基因组DNA片段可能会被引物扩增,从而产生这种结果。反应条件不合适:PCR反应的温度、时间
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问
qpcr结果可以绘制ROC曲线吗
dxyc42u
单纯的只有qpcr曲线无法做ROC曲线
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问
熔链曲线图谱数据分析
土井挞克树
可以使用image做熔链曲线图谱,把数据输入后选择图谱类型,然后进行输出
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问
求助|中国新药杂志投稿的要求难度
土井挞克树
可以直接去中国新药杂志的官方网站查询,或者给编辑部打电话发邮件查询的方式查询。
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问
【求助】希望能溶解SDS-PAGE凝胶(不需要保留蛋白)
土井挞克树
将无色透明的胶条从蒸馏水中取出,装入一准备好的1.5ml离心管中,用镊子夹碎(或在放入离心管之前用刀片切碎),我常用的是灭过菌的镊子夹碎。然后再在管里加入你所需要溶解蛋白的溶液,比如蒸馏水(生理盐水或PBS等)
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问
4T1细胞,传代后如图,活细胞长得快,但总有不贴壁,容易黏在一起生长,很难消化
loveliufudan
可以尝试以下建议:确保细胞在培养条件下正常生长:检查培养基、CO2水平、温度、湿度等因素是否正确。遵循正确的传代方法:确保每次传代前细胞密度不要过高,每次传代时要及时分离细胞,避免细胞黏连。检查细胞质量:使用显微镜观察细胞形态和活性,检查是否存在感染、突变或其他细胞质量问题。优化细胞培养条件:尝试不同的培养条件和培养基,如添加血清、生长因子等,以优化细胞生长。
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问
蛋白质的量与分子量
balalaLy
蛋白质定量是看里面的蛋白含量,单位是ng/ul,蛋白分子量是指某一种蛋白分子质量
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Hela细胞这样?算正常吗?求问大佬
loveliufudan
形态正常,但是细胞密度偏大,建议控制一下细胞密度,控制细胞密度不仅仅是为了维持细胞生长状态,还可以影响细胞的代谢、细胞功能以及相关实验结果的准确性。因此,选择适当的措施来调节细胞密度非常重要。
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问
提RNA的细胞样品这样放在冰上照了半小时紫外线还能用吗?
sswei
所有的操作均在15-30°C下进行,所用的试剂均放置于15-30°C。组织在加入氯仿之前是可以在-60—-70°C放置一个月 。RNA沉淀在75%乙醇中在2-8°C下至少可以放置一周,在–5— -20°C至少可能放置一年。提RNA的细胞样品这样放在冰上照了半小时紫外线还能用。
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问
肾组织电镜
sswei
-80℃冷冻肾组织不能做电镜标本。
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问
求问大鼠的TNC怎么取,万分感谢
土井挞克树
选取的健康小鼠取血清、血浆、或组织匀浆然后使用elisa的方法进行提取
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问
骨髓抑制模型
z流沙z
参考文献,然后设置几个不同梯度,摸索合适剂量
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问
小鼠骨骼pcr与正常组织pcr的实验步骤的异同之处及注意事项?
z流沙z
主要就是研磨,其他和正常组织提取RNA一样
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问
我想构建一个蛋白的截断质粒,但是查了Ncbi数据库发现有三个蛋白亚型,是不管这三个还是用其中一个构建?
sswei
相同基因编码的不同蛋白质亚型或许发挥着多样的功能,所以需选择一个与研究相关的一个蛋白亚型进行构建。
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问
目的蛋白洗脱不下来或洗脱率低是什么原因导致的?
rh682
洗脱剂种类,体积选用不足,pH条件等不适当。
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