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实验问答

27,609,600 科研人在看

问有没有战友做无细胞蛋白表达系统啊

loveliufudan

首先，确保您的质粒构建是正确的，包括检查您的DNA序列和构建方法是否正确。此外，您需要选择适合您的蛋白质的无细胞表达系统和载体，不同的蛋白质可能需要不同的系统和载体。其次，确保您的转化和诱导条件是正确的。对于BL21 (DE3)菌株，常用的是IPTG诱导，但是有时过高或过低的IPTG浓度都会影响蛋白质表达。此外，您需要在合适的时间点收获细胞，不同的蛋白质可能需要不同的时间点。最后，确保您的提取条件

2 回答623 围观

问细胞贴壁看不清楚

土井挞克树

不是本身的特性，这个细胞本身贴壁可以看清，考虑细胞密度低或者状态不好

4 回答328 围观

问帮我看看HepG2细胞

sswei

可能细胞在冻存以前就生长不良或者冻存过程中损伤过大。

3 回答538 围观

问hela平板克隆和培养

loveliufudan

有几个可能的原因导致hela细胞在平板克隆时不抱团生长，然后出现死细胞和散开的情况：细胞密度过低：平板克隆需要适当密度的细胞才能形成克隆，如果密度过低，细胞就会散开生长，导致克隆无法形成。细胞寿命过长：HeLa细胞在长期培养中会逐渐失去抱团生长的特性，细胞的寿命也会逐渐延长，这可能导致细胞的死亡率增加。培养基组分不足：平板克隆需要充足的营养和生长因子，如果培养基组分不足，细胞就会死亡或生长缓慢，无

2 回答830 围观

问求助！钙成像实验

loveliufudan

1.给细胞灌注不同的溶液通常可以使用温和的灌流系统，例如可以使用微注射泵和针头将溶液缓慢地灌入特定位置。这种方法需要特殊的仪器和技术，需要较高的实验技能。2.直接用板子多做几个孔对应加不同的溶液去拍荧光是可行的。这种方法比较简单，但需要注意的是，在加入不同的溶液之前，要将细胞平稳地定位在视野中。3.钙成像实验通常可以使用专门的软件来分析数据并生成峰值图。这些软件通常可以根据时间序列数据计算出钙离子

2 回答994 围观

问求助:sw620形态，这是细胞密度太大，长第二层了吗？

loveliufudan

这种情况下，建议将细胞密度适当降低，并尝试将细胞重新分散均匀，可以轻轻吹气或者振荡离心管使细胞均匀分散。关于细胞长第二层和细胞融合的区别，细胞长第二层是指在细胞培养皿上，细胞在原有的一层基础上增生，形成的新的一层细胞。而细胞融合是指不同的细胞融合在一起形成的大细胞。通常，在细胞培养的过程中，不同的细胞类型不会发生自发的融合现象。如果您是从细胞库中购买的SW620细胞，那么这种情况下应该是聚集的情况

2 回答955 围观

问研究动脉粥样硬化内皮细胞时，选哪种细胞比较好。除了人脐静脉细胞之外

loveliufudan

除了人脐静脉内皮细胞之外，可以考虑使用人肺微血管内皮细胞（HPMEC），人髂动脉内皮细胞（HIAEC）等来源的内皮细胞，这些细胞来源于人体内的不同器官，具有不同的特性和生理功能，适合用于研究不同疾病的发病机制。此外，还可以使用小鼠动脉内皮细胞（MAEC）等动物来源的内皮细胞作为模型，这些细胞来源于小鼠动脉组织，可用于研究动脉粥样硬化等相关疾病的发病机制。选择合适的内皮细胞需要考虑实验目的、研究对象

3 回答659 围观

问平板克隆实验求助

loveliufudan

根据您提供的情况，小尾巴可能是细胞在移动过程中留下的痕迹。一种可能的解释是，您在平板克隆或细胞克隆时，细胞密度太高，导致细胞无法自由移动，只能通过伸长的方式扩散到周围的空间。当细胞扩散到较远的位置时，就会留下一条痕迹，形成小尾巴。为了避免这种情况，您可以尝试减少铺板密度或在进行克隆时增加细胞数目，以便让细胞有足够的空间自由移动。此外，在换液时注意不要过度搅动细胞，以免对细胞造成不必要的压力。

3 回答736 围观

问细胞因子刺激细胞时加过量了

sswei

在一些情况下，若T细胞不能消除免疫刺激源，会导致负反馈回路的形成，进一步抑制免疫反应。

4 回答674 围观

问求助Ⅰ过敏性鼻炎大鼠造模鼻腔出血是什么原因？

sswei

氢氧化铝会致鼻腔粘膜干燥出血，需适当降低氢氧化铝的量。

3 回答826 围观

问请教一下普通WB做泛素化条带应该怎么设计实验呢

loveliufudan

如果您想检测p53的泛素化，可以将细胞或组织样品进行裂解，然后用p53抗体进行免疫共沉淀（IP），将泛素化的p53捕获下来，最后通过WB检测泛素化的产物。具体实验步骤如下：细胞或组织样品的裂解：将培养细胞或组织样品加入裂解缓冲液中，加入蛋白酶抑制剂，离心裂解液去除细胞碎片和细胞核。免疫共沉淀：将裂解液加入p53抗体预先吸附的蛋白A/G琼脂糖糖珠中，免疫共沉淀泛素化的p53蛋白。如果您的样品中p53

3 回答8403 围观

问小鼠皮下胶冻样物质

loveliufudan

这种胶冻状物质可能是脂肪坏死组织，也称为坏死性脂肪炎。坏死性脂肪炎是一种常见的脂肪组织疾病，常见于肥胖和代谢性疾病患者，如糖尿病患者。在小鼠模型中，高脂饮食也可以引起坏死性脂肪炎。它通常是由于脂肪组织供血不足引起的，导致组织坏死和胶冻状物质的形成。

2 回答567 围观

问免疫组化求助

balalaLy

优化实验条件最好不要同时改变多个因素。建议先用1:50的浓度延长孵育时间，如果做出来了再调整浓度。如果再做不出来，建议你考虑更换抗体或者是不是你的样品不表达。

3 回答394 围观

问Jurkat/MA cells 是什么细胞啊？

汤姆卜丽波

是杂交细胞，同时具有两种细胞的遗传基因和特征

3 回答1061 围观

问求助：买的通过流式检测的抗体，可以用酶标仪来测吗

汤姆卜丽波

应该也是可以的，像做elisa一样然后测显色就可以

3 回答484 围观

问SD大鼠睾丸支持细胞提取分离培养

loveliufudan

在使用两步酶消化法提取睾丸支持细胞的过程中，消化完胰酶后，一般需要离心沉淀并弃掉胰酶，避免其影响后续的细胞培养。然后再加入FBS停止消化，并通过过滤器过滤掉组织碎片等杂质。上清里的细胞可以一起倒掉，收集下来的细胞沉淀进行细胞培养。对于SD大鼠睾丸支持细胞的培养，一般需要使用DMEM或DMEM/F12培养基，加入10%胎牛血清或FBS等生长因子和抗生素抗菌素，可以在37°C、5% CO2条件下进行培

2 回答768 围观

问dsRNA质量检测标准

汤姆卜丽波

一般的，我们只看OD260/OD280（Ratio，R）。1.82.0时，我们认为RNA中蛋白或者时其他有机物的污染是可以容忍的，不过要注意，当你用Tris作为缓冲液检测吸光度时，R值可能会大于2（一般应该是<2.2的）。当R<1.8时，溶液中蛋白或者时其他有机物的污染比较明显，你可以根据自己的需要决定这份RNA的命运。当R>2.2时，说明RNA已经水解成单核酸了

3 回答1267 围观

问番茄组培接种番茄种子暗处理后有一罐种子发芽特别少，这是为什么呢？

汤姆卜丽波

有可能是你蒸馏水洗的不够导致有细菌保留，和种子竞争培养基

2 回答1551 围观

问3T3-l1细胞有没有诱导分化之后再做转染的情况，如果有需要什么条件才可以进行呢？

汤姆卜丽波

没什么特殊条件，和正常转染一样，lipo2000瞬转或者慢病毒稳转都可以

3 回答322 围观

问氨茶碱用于细胞实验，买的规格是mg，最后作用于细胞需要终浓度大概10-5次方mol/L，这种需要怎么稀释呢？

认真搞科研的小王

先配置母液1mol/l或者0.1mol/l之后，可以以10倍梯度稀释，将母液稀释至想要的浓度。

3 回答673 围观

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