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实验问答

23,124,583 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问实验室已构建好的质粒怎么克隆扩增啊

loveliufudan

要克隆扩增已构建好的质粒，一般需要进行以下步骤：选择适当的限制性内切酶将质粒线性化。这可以通过在限制性内切酶反应体系中将质粒加入并加入相应的限制性内切酶来完成。准备DNA片段，可以通过PCR扩增、限制性内切酶切割等方法获得。DNA片段需要和质粒上的限制性内切酶切口互补配对。将线性化的质粒和DNA片段进行连接。这可以通过DNA连接酶进行连接。将连接后的混合物进行转化到适当的细菌中。可以通过热激转化、

3 回答1846 围观

问想要做细菌的定量pcr，细菌常用的内参是什么

loveliufudan

在细菌定量PCR实验中，常用的内参包括：16S rRNA基因：这是一种高度保守的基因，在细菌中广泛存在。在细菌中，16S rRNA基因的序列差异很大，因此需要根据目标细菌的种类选择合适的引物和探针。rpoB基因：这是一种编码细菌RNA聚合酶的亚基的基因，也是一种广泛存在且高度保守的基因。gyrB基因：这是一种编码细菌DNA旋转酶亚基的基因，也是一种常用的内参。

4 回答12917 围观

问SIMCA 14处理代谢组学数据计算VIP值要考虑置信区间吗？

loveliufudan

在使用SIMCA软件计算VIP值时，并不需要考虑置信区间。VIP值是通过对模型中每个变量（代谢物）的贡献度进行统计计算得出的，而VIP值的大小主要取决于变量的贡献度和数据的样本大小等因素。在已经通过置换检验验证了OPLS-DA模型的可靠性之后，计算VIP值可以被认为是合理的。然而，置信区间仍然是代谢组学数据分析中的一个重要问题。在样本量较小或噪声较大的情况下，计算VIP值可能会受到较大的偏差，因此

2 回答2216 围观

问单倍型系统发育树如何构建？

loveliufudan

单倍型系统发育树的构建通常需要以下几个步骤：选择适当的DNA标记：单倍型系统发育树的构建需要使用高变异性的DNA标记。不同的研究对象可能需要不同的DNA标记，例如，对于人类来说，常用的DNA标记包括线粒体DNA序列和Y染色体DNA序列。样本采集和DNA提取：采集样本并提取DNA，确保DNA的纯度和完整性。PCR扩增：使用适当的引物对DNA标记进行PCR扩增，并使用PCR产物进行序列测定。序列比对：

3 回答2255 围观

问小鼠皮肤光老化模型中每次照射时长

sswei

将紫外线照射仪置于小鼠上方30厘米处，每周照射6次，最初照射剂量为20分钟/天，每周增加10-30分钟/天，剂量维持在120分钟/天，持续8周。

3 回答1199 围观

问组织蛋白wb验证，内参跑出来一抹黑

sswei

使用过于粗糙或过于缓慢的洗膜步骤可能会导致高背景值。抗体过时或受损：过时或受损的抗体可能会导致高背景值。蛋白质降解：样品中蛋白质降解可能会导致高背景值。

3 回答462 围观

问想染小鼠脊髓的神经细胞，取完spinal cord 然后放入PBS，之后OCT frozen，忘了fix 和sucrose怎么办

loveliufudan

如果您在取完小鼠脊髓后，忘记了加入固定剂（如formalin等）或脱水剂（如sucrose等），那么这些细胞可能会受到影响，导致结果不可靠。如果您需要分析神经元的形态和分布，可以尝试使用已经固定和脱水的样本进行下一步操作。如果您需要进行免疫染色或原位杂交等实验，可以尝试使用冰冻切片来进行。在这种情况下，您可以将OCT中包裹着的脊髓组织切割成10-20微米的薄片，然后将其存储在-80°C的冰箱中。切

3 回答637 围观

问如果想以不同饥饿时间处理为实验组探究饥饿对肿瘤细胞增殖的影响，请问该如何设计克隆形成实验以保证饥饿效果不会被回补？

loveliufudan

可以考虑以下步骤：1.选择一种易于生长和繁殖的肿瘤细胞系，如HeLa或MCF-7，并确保其稳定生长状态。2.将肿瘤细胞分为两组：实验组和对照组。在实验组中，细胞应该在低营养条件下培养，如低糖或无血清培养基中。而在对照组中，细胞应该在常规培养条件下培养，如含有足够营养的培养基中。3.在实验组中，应该选择不同的饥饿时间，如24小时、48小时和72小时，并在这些时间点测量细胞增殖情况。同时，在对照组中，

3 回答1067 围观

问求问肿瘤细胞稳转后药筛，多久换一次培养基呀

huarenqiang5

肿瘤细胞稳转后药筛，一般2－3天换一次培养基。

6 回答469 围观

问免疫共沉淀实验，用裂解液裂解细胞后的液体非常粘稠，离心后也非常粘稠，用2.5微升枪头也没办法吸取上清，怎么办？

loveliufudan

如果进行免疫共沉淀实验时，裂解液非常粘稠，可能是因为细胞裂解不彻底或者存在大量的DNA或RNA等高分子物质，导致样品粘稠。这种情况下，可以尝试以下几种方法：1.调整细胞裂解条件：可以尝试更改裂解液的pH值、NaCl浓度、甘油浓度、Triton X-100浓度、EDTA浓度等条件，以优化细胞裂解效果。如果使用冷冻切割法等机械方法裂解细胞，则需要对样品制备过程进行优化。2.增加离心时间或速度：可以将样

3 回答3400 围观

问做动物植皮实验大鼠如何取中厚皮，取皮后供皮区如何处理？

sswei

应用取皮鼓切取0.3--0.45mm厚度以及相应面积大小的皮片。

3 回答666 围观

问Caco2细胞药物转运

汤姆卜丽波

有可能是你的溶剂本身对药品后续的电阻测量完成了干扰

3 回答724 围观

问AngII皮下埋泵缓释为什么导致腹主动脉瘤造模不成功？

loveliufudan

这里我提供一些建议供您参考：重新评估给药剂量和给药方式：您可以尝试调整药物的剂量，增加给药浓度，或者改变给药方式（例如静脉注射）来观察血压的变化。同时，参考其他相关研究，了解他们在类似实验中使用的药物剂量和给药方式。检查皮下缓释泵的功能：确保皮下缓释泵的功能正常，药物能够稳定释放。请定期检查泵的工作状态，以及药物在泵中的剩余量。选择其他动物模型：ApoE敲除小鼠可能对高血压的发展和药物干预具有特异

3 回答787 围观

问这两个蛋白质三级结构的化学键分别是什么键，这两个键的功能应该不一样吧，对于蛋白质的功能有影响吗

sswei

化学键分别是氢键和盐键，用以维持蛋白质三级结构的形成与稳定。

2 回答712 围观

问回归分析中纳入的变量必须要先单因素后多因素分析再决定吗？

hehe卓

不一定，可以将与要分析的因素有关的因素加入直接进行多因素回归分析

4 回答5285 围观

问电转感受态大肠杆菌如何制备，电转流程是什么，其过程需要注意什么细节

sswei

制备电转感受态大肠杆菌步骤:1.挑选一个大肠杆菌菌落，并将其接种在20mL LB培养基中，并在37°C振荡培养过夜。2.以1％的接种量接种20mL LB培养基，并在37°C下以230 rpm的转速摇动3小时。3.取1ml培养物，冰浴30分钟，在4℃以4,000 r / min离心3分钟，然后除去上清液。4.加入500 ul冰冷的0.1 mol / L CaCl 2溶液，重悬细菌沉淀，在4℃以4,0

3 回答3507 围观

问EMSA实验中纯化蛋白的量和已标记探针的比例是多少？

sswei

对每一个特定的结合蛋白和探针，所用纯化蛋白的摩尔数是标记探针的5倍。

3 回答2228 围观

问Western Blot内参不齐有什么方法可以改善？

汤姆卜丽波

首先做好定量，按照标准曲线加内参，少的多加点，如果还是不齐，那就可能是内参不对，换一个内参

2 回答835 围观

问求教用LPS诱导Caco-2 细胞炎症的相关问题？

汤姆卜丽波

推荐你做一个时间和浓度梯度实验，我们用3ug然后四到六小时

3 回答939 围观

问给位大神，膜成了这个样子是怎么回事啊，感谢解答！

sswei

可能存在转膜电压过高，解决办法降低转膜电压。

3 回答366 围观

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