实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问如果想以不同饥饿时间处理为实验组探究饥饿对肿瘤细胞增殖的影响，请问该如何设计克隆形成实验以保证饥饿效果不会被回补？

loveliufudan

可以考虑以下步骤：1.选择一种易于生长和繁殖的肿瘤细胞系，如HeLa或MCF-7，并确保其稳定生长状态。2.将肿瘤细胞分为两组：实验组和对照组。在实验组中，细胞应该在低营养条件下培养，如低糖或无血清培养基中。而在对照组中，细胞应该在常规培养条件下培养，如含有足够营养的培养基中。3.在实验组中，应该选择不同的饥饿时间，如24小时、48小时和72小时，并在这些时间点测量细胞增殖情况。同时，在对照组中，

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问做动物植皮实验大鼠如何取中厚皮，取皮后供皮区如何处理？

sswei

应用取皮鼓切取0.3--0.45mm厚度以及相应面积大小的皮片。

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问Caco2细胞药物转运

汤姆卜丽波

有可能是你的溶剂本身对药品后续的电阻测量完成了干扰

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问盆腔炎大鼠造模需要手术嘛？用到哪些细菌？有没有哪些注意事项。本人小白，有大神或者前辈能讲一些细节嘛，万分感谢

loveliufudan

在动物模型中，盆腔炎可以通过给大鼠注射细菌来造成。下面是造模需要注意的细节：手术：盆腔炎大鼠造模需要进行手术，手术需要在无菌条件下进行。在手术前，需要将大鼠进行禁食和水，以减少手术过程中的胃内容物和膀胱液的污染。在手术过程中需要注意保持手术器械、手术区域的无菌状态，以避免细菌污染。细菌：盆腔炎大鼠造模需要使用盆腔炎相关的细菌。可以使用已知的盆腔炎病原细菌，例如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等，也可以使用

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问做动物实验时怎么脱毛？有什么高效彻底的方法吗？

sswei

可采用以下方法1. 剪毛法紧贴动物皮肤，按序将被毛剪去。注意千万不能用手提起被毛剪，以免剪破皮肤。剪取时，应逆着毛发的方向剪取。 2. 拔毛法家兔耳缘静脉注射或采血时最常用。将家兔固定后，用拇指和食指将所需部位的被毛拔除，涂上 70%酒精消毒后，可清楚地显示血管。3. 剃毛法电动剃刀（电推子）：须逆毛方向剃毛刮胡刀（刮胡刀片）：先用

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问这两个蛋白质三级结构的化学键分别是什么键，这两个键的功能应该不一样吧，对于蛋白质的功能有影响吗

sswei

化学键分别是氢键和盐键，用以维持蛋白质三级结构的形成与稳定。

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问以昆虫cDNA为模板进行PCR无法克隆目的片段

桃之zbx

有可能DNA浓度过低，有没有测过DNA浓度呀酶有没有把目的片段切碎呀PCR的温度和时间调整一下直接送公司测一代看看能不能测出来，反馈结果是什么

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问外泌体超速离心后，离心管底部出现褐色沉淀,这是为什么？

sswei

因为外泌体样品中含有杂质的缘故。

4 回答1007 围观

问葡聚糖凝胶柱子装柱后，过几天总是会在底部出现气泡，好几次了，重新装柱子，前几天不会有，过几天就又出现

土井挞克树

考虑是环境温度变化产生的气泡，注意使用时保存温度稳定

3 回答1721 围观

问易错pcr如何才能p出亮的条带

汤姆卜丽波

主要是你要用到特异性高的引物，然后循环时间多一点

3 回答853 围观

问电转感受态大肠杆菌如何制备，电转流程是什么，其过程需要注意什么细节

sswei

制备电转感受态大肠杆菌步骤:1.挑选一个大肠杆菌菌落，并将其接种在20mL LB培养基中，并在37°C振荡培养过夜。2.以1％的接种量接种20mL LB培养基，并在37°C下以230 rpm的转速摇动3小时。3.取1ml培养物，冰浴30分钟，在4℃以4,000 r / min离心3分钟，然后除去上清液。4.加入500 ul冰冷的0.1 mol / L CaCl 2溶液，重悬细菌沉淀，在4℃以4,0

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问为什么在细胞培养实验中，我培养的细胞分布不均匀，会出现不规则黑点，可能是什么原因导致的？

汤姆卜丽波

如果有不规则黑点，首先观察培养基有没有污染，可以空培看看，然后看是不是环境黑胶虫污染

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问EMSA实验中纯化蛋白的量和已标记探针的比例是多少？

sswei

对每一个特定的结合蛋白和探针，所用纯化蛋白的摩尔数是标记探针的5倍。

3 回答2178 围观

问Western Blot内参不齐有什么方法可以改善？

汤姆卜丽波

首先做好定量，按照标准曲线加内参，少的多加点，如果还是不齐，那就可能是内参不对，换一个内参

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问HE染色封片后能重染吗?

sswei

已经HE染色封片后的组织一般不能再进行染色，因为封片的过程会将组织固定在了载玻片上，使其不再具有活性，无法进行染色反应。

3 回答2168 围观

问ST细胞和PK细胞传代时，怎样防止其聚堆生长？

sswei

原因:传代时细胞吹打不均匀，没有将细胞团吹散；吹打太用力造成细胞死亡，细胞死亡释放的DNA与其他细胞形成黏性的细胞团；细胞离心速度多大或者离心时间过长；细胞长的太满才进行传代操作。正确做法：消化前加入适量缓冲液对细胞进行清洗，清除死亡的细胞团和部分堆叠杂质；消化后吹打时上下左右吹打约10次左右，注意控制力度；确定细胞正确的离心条件，严格按条件执行；细胞汇合度在80%~90%即可传代。

4 回答515 围观

问求教用LPS诱导Caco-2 细胞炎症的相关问题？

汤姆卜丽波

推荐你做一个时间和浓度梯度实验，我们用3ug然后四到六小时

3 回答922 围观

问给位大神，膜成了这个样子是怎么回事啊，感谢解答！

sswei

可能存在转膜电压过高，解决办法降低转膜电压。

3 回答355 围观

问目的蛋白是否外泌出细胞外的验证

汤姆卜丽波

如果你的目的蛋白太少了其实wb很难检测到，可以用elisa试试，你也可以把细胞沉淀也试试

3 回答453 围观

问WB检测GFP融合蛋白，条带大小不对

loveliufudan

可能是由于以下几个原因：目的蛋白融合GFP后的蛋白质折叠发生改变，导致抗体无法识别目的蛋白的特异性表达区域。这种情况下，建议尝试更换抗体，或者使用不同的抗体进行检测。目的蛋白融合GFP后的蛋白质含量较低，导致条带大小与GFP相似。这种情况下，可以尝试增大加载样品的量，或者使用更敏感的检测方法。目的蛋白融合GFP后的蛋白质降解或者聚集，导致条带大小发生改变。这种情况下，建议在提取过程中加入蛋白酶抑制

3 回答2972 围观

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