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问
请问老师,在病理状态下有些蛋白的作用是低亲和力的或者是短时间的结合,请问如何提高低亲和力活着短时作用的蛋白呢?
土井挞克树
可以使用交联剂增加蛋白间的亲和力和结合力,保证互作的检测
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问
蛋白丰度比较低,除了加大细胞投入量还有其他方法改进吗?
土井挞克树
蛋白丰度较低,可能是细胞裂解的不够充分,这时候需要更换裂解液,如果裂解充分建议还是增加细胞含量
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问
瞬时互作蛋白怎么交联
土井挞克树
可以选择紫外线交联,或者化学交联法。蛋白质通过交联方法可以稳定或永久连接相互作用复合物中的成分,有助于鉴别这些瞬时接触。
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问
交联剂的使用,是结合更容易和牢靠吗,感觉平时实验好像没用到
赛默飞世尔科技
交联剂主要是在相互作用较弱的蛋白互作检测中会用到,因为蛋白间相互作用较弱,很容易在样本制备过程中就破坏掉,所以这种情况下会推荐使用交联剂先固定住蛋白间的相互作用,以保证在后续CO-IP实验中被检测到。对于蛋白间相互作用比较强/稳定,在温和裂解液中不会破坏掉蛋白间的相互作用,这种情况就不需要用到交联剂。
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问
我想请问coip蛋白破碎离心后,浮在上层的白色物质会不会影响蛋白与珠子结合,有什么办法可以避免吸到白色物质吗?
土井挞克树
可以用吸管缓慢多次吸取掉白色物质,或者加pbs稀释,更容易清除一些
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问
免疫共沉淀-样品制备 哪些步骤是可以灵活调整的,比如哪一步可以暂停一下?
土井挞克树
一般建议尽快裂解,负八十度保存不要超过三个月,时间太长会造成蛋白降解
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问
裂解液成分中Triton x 100,NP-40,SDS,deoxycholate这几个哪些是CoIP比较适用的?为什么? 细
土井挞克树
我一般会选择Triton x 100,因为coip通常不需要那么强的裂解作用,其他几种容易裂解过度
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问
有适用于植物的IP裂解液产品吗
土井挞克树
可以选择植物RIPA裂解液,裂解效果比较强
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问
交联试剂盒里的细胞裂解液需要额外再加蛋白酶抑制剂么?
土井挞克树
一般是不需要的,裂解液中包含蛋白酶抑制剂,如果实验过程中蛋白降解太多,建议另外添加
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问
关于膜蛋白的Co-IP,有没有比较高效提取膜蛋白但是不破坏蛋白相互作用的裂解液呀
土井挞克树
这个可以考虑某些品牌新出的试剂盒,据说效果都不错,或者使用离心管柱法进行提取,能最大程度的保护蛋白性质不被破坏
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问
细胞裂解液用乙酰化抗体富集IP后,胶内酶解MS检测会不会丢失一些痕量修饰的蛋白
土井挞克树
又可能会少量丢失或降解,痕量修饰蛋白在酶解时可能有少量丢失
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问
老师用动物组织标本做COIP与细胞做COIP有什么区别?您更推荐哪个?
土井挞克树
胞内蛋白做coip一般选用细胞标本,胞外蛋白一般选择组织标本/
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问
老师:做COIP实验的时候,是必须选择平时所用的某特异的细胞,还是用工具细胞也可以?
土井挞克树
最好是特异细胞,特异度高的细胞可以避免分选误差。
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问
1.如遇组织标本,如何保证单细胞测序的细胞单一性? 2.如何就获得的数据进行深度挖掘? 3.如何平衡机体的个体差异与测序广泛性?
loveliufudan
1.针对组织标本进行单细胞测序时,保证细胞单一性的关键在于细胞的分离和捕获。通常采用酶消化、机械切割或磨碎等方法对组织样本进行分离和制备,然后通过流式细胞术、微流控芯片或微管阵列等技术将单个细胞捕获到反应管中进行测序。在这个过程中,需要注意以下几点:对组织样本进行消化或切割时,要尽量减少细胞的损伤和死亡,以避免影响单细胞测序的准确性。在捕获单个细胞时,要确保细胞的完整性和纯度,避免污染和杂交现象的
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问
请问用试剂盒检测神经递质是检测细胞培养上清的成分还是细胞内的成分?这两者有什么区别吗?
huarenqiang5
用试剂盒检测神经递质时,建议检测细胞培养上清的成分比较好。
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问
请问乙型溶血性链球菌在哥伦比亚血平板中培养超过24小时会发生自噬吗
huarenqiang5
乙型溶血性链球菌在血平板中培养超过24小时一般都会发生自噬。
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问
细胞油红O染色一定要做成爬片吗
huarenqiang5
不是必须要进行爬片,但是建议进行爬片,因为直接在板里染板的话可能会导致染的不均匀,而影响观察从而导致结果有误。
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问
细胞中的团块,是死去的细胞吗
坤坤爱篮球
看着是的,很正常,死去的细胞团,你晃一下应该还飘,一换液就没了
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问
WB显影整张膜都是黑的
dxy_xextz7w2
控制TBST的ph值在7.4左右可以改善大片黑的情况,但是如果改善不了可能是抗体的问题
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问
幽门螺旋杆菌的培养使用配套培养基还是自己配比较经济实惠?
那兔那兔
配套的成功率高点,自己做的话比较麻烦,万一不成功还得重来
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