实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问为什么包病毒的293细胞会缩，然后飘起来，病毒效价不好？

sswei

可能细胞状态不好，或细胞太密。

5 回答2184 围观

问内参不齐该如何调整上样量，使用Image Lab吗？

土井挞克树

内参跑不齐。一般是跑胶时电流或电压太大。还有可能是样品中参杂着盐离子等其他物质也会造成跑不齐。调整上样量可以使用image la b

4 回答5372 围观

问为什么细胞解冻后，活细胞占比较低?

huarenqiang5

出现低存活率的可能原因及解决方案如下：1.解冻过程中细胞裂解解决方案：可预期到一定量的细胞死亡，因此细胞的浓度应足够高，考虑到这一损失。起始浓度为106至107细胞/毫升。2.解冻过程中的问题解决方案：在-70℃至-80℃下保存冷冻的培养物，保存时间为1-5天，但这不是保存的首选方法。在37℃充分解冻后应立即开始培养。3.对冷冻液过敏解决方案：A.完全或部分更换培养基，减少培养基中冷冻液的量。在2

5 回答371 围观

问血清中的沉淀物对细胞培养有影响吗？

huarenqiang5

血清中的沉淀物对细胞培养没有影响。

6 回答355 围观

问间充质干细胞支原体污染后对细胞生长的影响？

huarenqiang5

支原体污染后对细胞的影响主要是:1.影响细胞的生长状态及形态。2.影响细胞的代谢和功能。

4 回答297 围观

问流式检测细胞周期细胞数少的问题

土井挞克树

增加离心时间，离心力过大也会对细胞产生破坏

2 回答2224 围观

问分离PEDV一种病毒，大家都是用多少浓度的胰酶呢，胰酶要洗掉吗，孵育多长时间呢

土井挞克树

一般选用10ug/ml的胰酶，需要洗掉

4 回答704 围观

问请问胰酶的加量和消化程度怎么判断呢？消化多久呢？加全培中和的话比例是多少比较好？

huarenqiang5

胰酶加量略盖过细胞即可，一般消化时间在1－3分钟比较合适。

5 回答3657 围观

问细胞空隙之间有黑色点状物，多次传代之后仍然存在。请问这是什么？该如何去除?

sswei

1. 细胞碎片在细胞培养中不合适操作引起的化学或物理上的刺激，例如胰酶消化时间过长，会导致细胞死亡，从而产生很多碎片。2. 凋亡小体在体外培养条件下，细胞很容易受到环境改变的影响，诱发细胞的凋亡，产生凋亡小体。将细胞用 PBS 洗 2~3 遍，洗的时候，轻轻拍打培养瓶，让贴壁不牢的碎片和颗粒脱落，再弃去 PBS，消化时先加低浓度的胰酶如 0.05% 胰酶消化 1 min 左右，让细胞间隙中的颗粒和

6 回答1561 围观

问293T细胞生长速度不稳定是怎么回事？

sswei

293T细胞很不好养，细胞贴壁性不是很好，且消化的度不是太好掌握，操作时动作一定要轻。如果细胞状态不好的话，考虑添加点NEAA。就是有的时候操作可能动作大了点，细胞就会破碎，293系列的细胞基本上都是这个特性，刚复苏的时候贴壁较慢，可以在培养箱多放一天让它多贴壁。平时培养过程中贴壁较差，拍打或液体冲洗都可以使细胞脱落，所以消化时间很快，胰酶可以适当降低浓度，不要加EDTA了，基本上不要放到37度的

5 回答797 围观

问细胞慢病毒稳转后会有明显细胞活力改变吗？若改变，该如何处理？以及用稳转系肿瘤细胞构建皮下注射的移植瘤模型是否有免疫原性问题？

土井挞克树

如果病毒对细胞有毒性的话是会影响细胞活力的，这种情况建议降低病毒滴度。

3 回答711 围观

问请问下，在高效液相检测维生素C，总是出现平行进样两针峰面积差异大？

土井挞克树

可能是基线不一致的原因，建议把基线调平后再平行进样。

2 回答1581 围观

问在诱导iPSC向NK细胞分化过程中，如何提高分化效率？什么因素可能会影响分化效率？

sswei

影响细胞分化的因素有：①胞外信息分子。包括近端组织的相互作用和远距离的信号分子。②细胞记忆及决定对细胞分化的影响，即在能识别一个细胞的分化以前，就有了一个预先保证细胞怎样变化的时期。③受精卵细胞质的不均一性对细胞分化的影响。受精卵中预先储存的隐蔽mRNA不均一的分配到子细胞中，从而决定子代细胞的分化命运。④细胞间的相互作用与位置效应。细胞所处的位置可导致细胞分化方向的改变。⑤染色质变化与基因重排对

4 回答884 围观

问细胞培养过程中有支原体污染怎么办？

sswei

支原体污染细胞后，有必要清除支原体，常用方法有：1）对于非重要、易培养的细胞，将培养物与用过的培养基灭活后丢弃即可。对于较为重要的细胞，如来源珍贵或保藏量较小等可以采用以下（2）-（8）的方法。2）用 MRA 处理：用支原体清除剂（Mycoplasma Removal Agent）处理细胞，1-2 周可以清除支原体。3）用清洗纯化法清除支原体污染的方法：细胞营养驯化→优质细胞群的筛选→细胞清洗→反

4 回答762 围观

问细胞培养出现白色的一层膜是什么情况

loveliufudan

出现在细胞培养基上层的膜可能是由细胞分泌的胞外基质（extracellular matrix）或蛋白质组成的。这种现象通常被称为"细胞层上的蛋白质膜"或"细胞纺丝"。细胞分泌的胞外基质是一种由细胞合成和分泌的复杂混合物，其中包含许多蛋白质、多糖和其他分子。这些物质可以聚集在培养基表面形成薄膜状结构。这种现象可能是由于细胞在培养过程中增殖并分泌了大量的胞外基质，导致其在培养基上形成一层薄膜。这种膜通

4 回答4933 围观

问Huvec加了erastin没作用

huarenqiang5

rsl3诱导效果相对来说要稳定些。

3 回答605 围观

问铁死亡中细胞内ROS与脂质ROS区别？

loveliufudan

铁死亡中细胞内ROS和脂质ROS的区别在于其产生的方式和作用对象。脂质ROS主要由脂质过氧化反应产生，作用于细胞膜上的脂质分子，导致脂质过氧化和膜损伤。细胞内ROS则是包括多种活性氧物种，可以来自不同的来源，对细胞内多种分子产生氧化损伤。在铁死亡中，铁离子的异常积累会促使细胞内ROS的产生增加，包括脂质ROS的生成。

2 回答6371 围观

问T2细胞

sswei

应用编号为4201PAT-CCTCC01237这一款就可以了。

3 回答731 围观

问老师们好，WB实验遇到这种问题是什么回事呀？感觉不是单一问题，为什么会出现这种情况呢？怎么处理呢？

yoloDP4U

可以更换新的电泳液，loading buffer也可以换新的

4 回答256 围观

问请问这是污染吗

相信光的人

像是细菌污染，建议进一步鉴别。

7 回答556 围观

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