实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问大家好，我现在正在做化学感受蛋白的荧光竞争结合实验，蛋白和探针结合曲线测不饱和

loveliufudan

以下是一些应该注意的细节： 1. 样品处理：确保你的样品（蛋白和探针）的纯度和质量是高的，以避免其他因素对实验结果的干扰。 2. 缓冲液选择：选择适当的缓冲液来稳定蛋白和探针的性质，并确保缓冲液不会干扰荧光信号的测量。 3. 实验温度：控制实验温度的一致性，因为温度的变化可能会影响蛋白和探针的结合性能。 4. 探针浓度选择：根据你的实验目的和预期的结合曲线测量范围，选择适当的探针浓度范围。确保在浓

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问如何去除血清/血浆中的载脂蛋白APO？

loveliufudan

一种可能的方法是使用免疫吸附色谱法，通过在低密度脂蛋白（LDL）柱上进行免疫吸附色谱，从而有效地降低血浆中的胆固醇水平。这种方法首先通过用猪LDL免疫羊，然后通过在LDL-琼脂糖上进行色谱，从他们的抗血清中选择性地吸附抗体，从而进行大规模生产和分离针对猪LDL的单一特异性抗体。然后，这些分离出的LDL抗体被共价连接到Sepharose CL-4B上。通过使用抗-LDL-Sepharose珠，猪血浆

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问为什么用DNS法测木聚糖酶活性的时候，我们是煮沸后再加的酒石酸钾钠啊，酒石酸钾钠的作用到底是什么？

loveliufudan

酒石酸钾钠在DNS法测定木聚糖酶活性时，起到以下作用： 1. 稀释酸性：酒石酸钾钠在酸性条件下将DNS溶液稀释为合适的浓度，以便对产生的还原糖进行准确测量。稀释后的DNS溶液可以更好地与还原糖反应，形成可测量的颜色。 2. 稳定性：酒石酸钾钠有助于稳定DNS溶液的化学性质。它可以防止DNS溶液在加热过程中发生分解或退色，从而保证测定结果的准确性。 3. pH调节：酒石酸钾钠可以调节溶液的pH值。D

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问KH2PO4在毕赤酵母发酵抗菌肽的作用？

loveliufudan

KH2PO4在毕赤酵母发酵抗菌肽的过程中可能发挥以下作用： 1. 营养源：KH2PO4可以作为毕赤酵母发酵培养基中的磷源和钾源。磷是生物体中的重要元素，对生物体的生长和代谢过程至关重要。钾在细胞内起着维持离子平衡和调节酶活性的作用。因此，KH2PO4提供了毕赤酵母在发酵过程中所需的营养元素。 2. pH调节：KH2PO4可以在培养基中起到调节pH的作用。根据所需的发酵条件，添加适量的KH2PO4可

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问THP1如何敲除基因？

loveliufudan

可以按照以下步骤进行： 1. 设计目标基因敲除的CRISPR/Cas9方案：确定你要敲除的基因，并设计CRISPR引导RNA（sgRNA）序列，用来帮助Cas9酶在特定位点切割目标基因。 2. 验证和合成sgRNA：合成设计好的sgRNA序列，并检验它在体外是否能够成功引导Cas9切割目标基因。这样可以确保sgRNA能够准确地与目标基因配对。 3. 构建载体：制作CRISPR/Cas9载体，一般是

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问细胞有霉菌污染应该用什么样的抗生素呢？

huarenqiang5

细胞有霉菌污染可以用两性霉素B、制霉菌素等。

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问如果培养幽门螺旋杆菌时间满三天还没长是不是证明培养失败，还是说可以延长培养时间，再等待等待?平板上什么菌的没长，不知道是什么原因

huarenqiang5

是的，一般情况下超过3天还没长出来说明培养失败。

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问硫酸铵沉淀法适合用于分离什么蛋白质呢？

loveliufudan

从海产品中提取金属结合蛋白的方法与一般蛋白质的提取方法可以有所不同。在你所提到的方法中，缓冲液可能是用于提取金属结合蛋白的特定试剂，而非一般的蛋白质提取试剂。硫酸铵沉淀是一种常用的蛋白质分离和富集方法。在这个实验中，硫酸铵被用来沉淀目标金属结合蛋白，从而实现与其他非目标蛋白的分离。硫酸铵沉淀法适用于许多蛋白质，因为它可以根据蛋白质的溶解度和盐度效应进行选择性沉淀。这种方法可以帮助去除一些不特异的蛋

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问细胞实验中，在培养基中加入HEPES有什么好处？

huarenqiang5

HEPES溶液是一种弱酸，主要作用是防止培养基pH迅速变动。在开放式培养条件下，观察细胞时培养基脱离了5%CO2的环境，CO2气体迅速逸出，pH迅速升高，若加了HEPES，此时可以维持pH7.0左右。一般在进行克隆化培养时要添加HEPES。

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问细胞实验中，培养基保存在4℃冰箱中，颜色偏暗呈碱性，可能是什么原因？

二五八万仔

培养基使用时间长了之后，剩下的培养基比较少的时候，颜色会偏紫色，属于正常现象

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问细胞培养实验中，培养液需要加双抗吗，是必须的吗？

大草原的小灰驴

不是必须的，加双抗是为了防止污染细胞，注意无菌操作和培养条件也能在一定程度上避免污染。而且双抗也不是能避免支原体和真菌的污染。

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问培养AML12细胞，传代两天后变成了这个样子，请问各位大神这是污染了吗😭，第一张是低倍镜，第二张是高倍镜的

sswei

镜下看培养液变黄，细胞聚团死亡，污染严重。这种情况下应该更换新的重新培养。

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问求问培养神经元细胞系的培养基只能用Neurobasal嘛，可以用DMEM/F12吗？

王琼33

看你培养什么神经元，我培养的外周神经系统DRG神经元，用的DMEM培养基

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问Pcr实验中出现这种线一般是什么问题，求大神解答。

大草原的小灰驴

非特异性扩增吧，查看一下核酸提取的过程有无问题，再看一下质控品和阴性、阳性对照的扩增曲线

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问求助关于ROC曲线交叉问题！谢谢！

huarenqiang5

你的这个曲线问题不大，不会有偏差，能够用。

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问miRNA转染

sswei

24孔细胞转染实验的终浓度建议采用50-100nM

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问还可以继续往下培养吗

坤临天下刘公子

看着还可以，联系继续培养，边培养边观察。

5 回答338 围观

问用IL-1β的10ng/ml刺激人原代软骨细胞，做时间点比较（24h,48h,72h），做CCK8敷育2h

huarenqiang5

考虑是低浓度的IL-1β导致的结果相反。建议提高IL-1β的浓度试试。

3 回答481 围观

问小鼠初始naive t细胞状态

huarenqiang5

从图片来看目前状态还行，可以继续养养看。

3 回答395 围观

问小鼠大脑免疫荧光染色结构疑问

feixue7758527w

CD31很容易渗入血管壁，因为看不到全貌，估计是小血管吧。

2 回答585 围观

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