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实验问答

23,100,675 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问求问双倒数法测酶活计算步骤？

土井挞克树

双倒数作图法(double reciprocal plot),又称为林-贝氏(Lineweaver- Burk)作图法 1.Vmax[S] Km+[S] 两边同取倒数 2.Km 1/V= + 1/Vmax 1/[S] Vmax (林-贝氏方程) 3.V= 1/V 1/Vmax -1/Km 1/[S] 以“1/v”对“1/[s]”作图,直线与x 轴交点即为-1/Km。4.代入回归方程求得酶活曲线

2 回答2681 围观

问求教，我跑的qpcr，同一组引物却有不同的Tm值，可能是什么原因？

土井挞克树

可能是计算方法不同，Tm值相差太大可以进行Touchdown摸索最佳的反应温度。

3 回答3961 围观

问基因的扩增，总是跑不出来，是什么原因呢？

土井挞克树

扩增失败，大概率是引物的原因。建议：拿到新引物后应从 Tm- 5℃ 寻找其适宜的扩增温度，在某温度起为特异性扩增。然后，在特异性扩增的温度下检测扩增效率：将 cDNA 梯度稀释（一般为 2×），测试稀释后的样本 Ct 值差异是否为 1 左右。1、若差值为 1，则扩增效率良好，可进行正式实验。2、若在特异性扩增的温度范围内不能使 Ct 值差异为 1，则需考虑重新设计引物

4 回答1772 围观

问培养增多人的软骨细胞具体操作方法及步骤

loveliufudan

当涉及到软骨细胞的具体培养方法时，以下是详细的步骤和操作：1. 细胞准备： - 从合适的来源（如人体骨骼或软骨组织）获得样本，通常需要手术或解剖获取。 - 将组织样本转移到含有生理盐水（PBS）的培养皿中，以保持组织的湿润。2. 细胞分离： - 用刀片或剪刀小心地将组织切割成小块，以增加细胞表面积。 - 将组织块置于含有消化酶（如胶原酶、DNA酶）的消化液中，通常在37摄氏度下进行

3 回答734 围观

问荧光定量检测CRP试纸，HOOK效应一般出现在什么浓度比较好？

sswei

当抗原抗体出现HOOK时经常会超出检测限而不能准确定量的检测出相关的数值，只有抗原抗体比例合适时才出现最强的反应，在检测限内检测出准确的数值。

3 回答669 围观

问wb实验在最下方loadibg处有条带，如何去除

loveliufudan

如果你在Western blot实验中发现一些不明的带，可能是由于一系列因素导致的，包括但不限于非特异性结合、蛋白降解产物、抗体的交叉反应等。以下是一些可能的解决策略： 1. 确认一抗的特异性：如果可能，尝试使用另一种一抗或者使用已知阳性和阴性对照来验证一抗的特异性。 2. 改变阻断条件：增加阻断时间，或者改变阻断液的组成。例如，如果你现在使用的是5%牛奶，你可以尝试使用5%BSA，或者使用含有T

3 回答788 围观

问edu染色488和33342为什么会这样啊

loveliufudan

可能是由于几个因素引起的： 1. 荧光染料渗透：有可能你的HOECHST 33342不仅染色了细胞核，也染色了细胞质。这可能是由于渗透作用，尤其是在高浓度或长时间孵育的情况下。 2. 细胞固定和渗透步骤：固定和渗透步骤对荧光染料的进入细胞内部起关键作用。如果使用的固定剂或渗透剂不恰当，可能会影响荧光染料的分布。 3. 具体的抗体或标记物：对于你的488染料，可能你的目标抗原主要位于细胞膜，而不是细

3 回答811 围观

问超声破碎的基因组dna怎么连接到我的质粒载体上，听说要修复加接头，怎么修复，接头是自己合成还是有专门试剂盒

huarenqiang5

接头建议使用专用试剂盒进行比较好。

3 回答372 围观

问PCR溶解曲线出不来这是什么原因？

huarenqiang5

考虑以下几点原因:1、引物没有设计好，溶解曲线就是为了区分样品是否有非特异性扩增和初始模板有无被污染的情况，实验室用BIOGHC-PCR检测了DNA，如果出现单一峰且峰值在Tm值位置出现，这就证明没有非特异性扩增，且初始模板没有被污染。2、没有给数据编号，数据在分析的时候需要分组。

3 回答3678 围观

问请帮忙讲解一下AAV DNA的滚环复制，单链是如何成双链的？

loveliufudan

滚环复制的基本过程： 1. 感染宿主细胞：AAV进入宿主细胞后，其单链DNA基因组会被宿主细胞核内的转录因子进行转录，形成mRNA。 2. 产生复制起始位点：转录过程中，AAV基因组的一个特殊区域，即基因组复制起始位点（replication origin），会形成一个短暂的双链DNA结构。 3. 倒转与剪切：复制起始位点的双链DNA结构会通过酶切和倒转的过程，将一个链剪切出来并倒转。 4. 合成

3 回答905 围观

问求助CC A分析用 R语言做了CCA分析，结果下表，Pr (>r)是啥意思，P值吗

loveliufudan

在CCA（Canonical Correspondence Analysis）分析中，“Pr(>r)“是相关系数检验的p值，用于评估特征和环境因子之间的相关性。在R语言中，进行CCA分析的函数是cca()，通常会输出一个结果对象，其中包含各种统计信息和检验结果。下表中的”Pr(>r)“列显示了每个特征与环境因子之间的相关系数检验的p值。p值是用于评估统计检验的结果的指标，它表示在零假设

3 回答800 围观

问1次自变量和3次因变量如何分析？

loveliufudan

在您所描述的情况下，如果自变量只有基线数据，而因变量有三次重复测量数据（纵向数据），您可以考虑使用GEE进行分析，该方法适用于分析纵向数据和考虑相关性的情况。GEE是一种广义估计方程方法，用于处理相关数据和重复测量数据。它可以用于探索自变量和因变量之间的关系，并考虑到测量之间的相关性。通过GEE，可以估计自变量对因变量的整体影响，并通过对不同时间点的测量数据进行建模，捕捉到时间的效应。关于缺失值处

2 回答701 围观

问meta小白提问//药物对比生存率分析

huarenqiang5

不需要踢出，你可以直接在对照组数据录入0即可。

3 回答471 围观

问有谁投过Annals of Noninvasive Electrocardiology

loveliufudan

一般来说，两个月的等待时间在许多学术期刊中都是正常的。这并不意味着你的论文会被拒绝或者出现其他问题。

3 回答172 围观

问Meta分析

loveliufudan

下结论时应该综合考虑多个因素： 1. 结果稳健性：如果逐一剔除法得到的结果在多次实验中保持一致，而剪补法的结果变化较大，那么可以认为逐一剔除法的结果更稳健。 2. 样本大小：考虑样本的数量和特征。如果样本较小，剪补法可能更容易受到极端值的影响，导致结果不稳定。而逐一剔除法通过多次计算，可以提供对不同样本子集的平均结果，有助于降低随机性的影响。 3. 数据分布：考虑数据的分布特征和假设的合理性。剪补

2 回答508 围观

问关于JAMA network open注册的问题

loveliufudan

以下是几个可能的解决方案： 1. 确认密码要求：再次检查密码要求，确保密码满足所有要求，包括长度要求、大写字母、小写字母和特殊字符的要求。可能有其他特殊要求，例如不能包含特定字符或连续重复字符等，请确保您的密码符合所有规定。 2. 密码重置：如果尝试多次后仍然无法注册，尝试使用“忘记密码”或“重置密码”的选项。通过输入您的注册邮箱或用户名，系统将向您发送重置密码的链接或说明，您可以通过该链接设置新

3 回答1664 围观

问文章中如何体现文章相关的研究项目？

loveliufudan

在写文章时，如果您的研究与ChiCTR（中国临床试验注册中心）注册的研究项目相关，您可以在文章的方法或材料部分适当提及该注册项目，以确保研究的透明度和科学性。以下是几种常见的方式来体现ChiCTR注册项目：1. 在方法部分：您可以在描述研究设计和方法的部分提及ChiCTR注册项目的信息。例如，可以简要介绍研究的注册号码、注册时间和注册链接等。这样可以向读者展示您的研究在设计和执行过程中遵循了临床试

3 回答337 围观

问求助‖SDS-PAGE蛋白电泳结果怎么看呢？细胞裂解泡的条带有很多条，有的只有一条的呢？

loveliufudan

在一条泳道上看到很多条带，可能表示裂解液中的蛋白质多样性比较高。每条带代表一种或几种分子量相近的蛋白质。带的明亮度通常与该蛋白质的浓度有关，更亮的带表示该蛋白质更丰富。如果在一条泳道上只看到一条带，可能有几种解释： 1. 这可能意味着裂解液中只有一种主要的蛋白质，或者所有其他的蛋白质都在检测限度以下。 2. 如果这是一个验证泳道，可能表明你的抗体非常特异，只检测到了你感兴趣的目标蛋白。 3. 如果

3 回答7109 围观

问HFD联合多次小剂量STZ腹腔注射造模二型糖尿病，不成功怎么补注射？

loveliufudan

可以考虑以下几点： 1. 确认注射剂量和方法：确保使用的STZ剂量准确，并检查腹腔注射的方法是否正确。如果注射剂量和方法都正确，可能需要重新评估该模型的适用性。 2. 考虑增加剂量：如果血糖未达到预期水平，可以考虑增加STZ的剂量，但需要谨慎操作。剂量增加应该根据实验室经验、文献报道和动物伦理规定进行决定，并且需要密切监测小鼠的整体健康状况和血糖水平。 3. 考虑增加注射次数：如果单次注射未能诱导

3 回答1854 围观

问蛋白质提取率计算，关于总蛋白和提取液蛋白含量的测定方法？

sswei

考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h内保持稳定。反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定

2 回答1381 围观

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