实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问海参提蛋白前脱色脱脂方法

sswei

传统脱色方法包括活性炭吸附法等，但是这些方法损失率高，利用膜分离法脱色则会克服传统脱色方法缺点。

3 回答483 围观

问这个bw 是什么意思

土井挞克树

图中的bw是体重的意思。每日50mg/kg bw

3 回答1603 围观

问MCF-7细胞传了四代，还是很慢很慢是为什么呢，正常这个细胞应该一天一传才对，可是放在小培养瓶里四天都长不满。

loveliufudan

如果你的MCF-7细胞在经过四代传代后仍然生长缓慢，可能有以下几个原因导致： 1. 细胞老化：细胞在不断传代过程中会经历老化现象，细胞增殖能力可能会降低。这可能导致细胞生长速度减缓或停滞。 2. 培养条件不适合：MCF-7细胞对培养条件比较敏感，需要适宜的培养基、适当的温度和CO2浓度等。如果培养条件不符合细胞的需求，细胞的生长速度可能会受到影响。 3. 感染或污染：细胞培养过程中，可能会出现细菌

3 回答993 围观

问求问双倒数法测酶活计算步骤？

土井挞克树

双倒数作图法(double reciprocal plot),又称为林-贝氏(Lineweaver- Burk)作图法 1.Vmax[S] Km+[S] 两边同取倒数 2.Km 1/V= + 1/Vmax 1/[S] Vmax (林-贝氏方程) 3.V= 1/V 1/Vmax -1/Km 1/[S] 以“1/v”对“1/[s]”作图,直线与x 轴交点即为-1/Km。4.代入回归方程求得酶活曲线

2 回答2608 围观

问求教，我跑的qpcr，同一组引物却有不同的Tm值，可能是什么原因？

土井挞克树

可能是计算方法不同，Tm值相差太大可以进行Touchdown摸索最佳的反应温度。

3 回答3912 围观

问实验小白，请问如何获取要培养的细胞（例如：单个核细胞；cd14+单核细胞）原代或细胞系的培养基信息，需要添加的细胞因子等信息？

天南9HRM

3 回答279 围观

问基因的扩增，总是跑不出来，是什么原因呢？

土井挞克树

扩增失败，大概率是引物的原因。建议：拿到新引物后应从 Tm- 5℃ 寻找其适宜的扩增温度，在某温度起为特异性扩增。然后，在特异性扩增的温度下检测扩增效率：将 cDNA 梯度稀释（一般为 2×），测试稀释后的样本 Ct 值差异是否为 1 左右。1、若差值为 1，则扩增效率良好，可进行正式实验。2、若在特异性扩增的温度范围内不能使 Ct 值差异为 1，则需考虑重新设计引物

4 回答1710 围观

问细胞实验中如何确定抑制剂和激动剂浓度？和IC50有关系吗？

feixue7758527w

抑制剂和激动剂浓度还是要根据文献进行选择的，如果没有相关文献，只能自己从中间浓度慢慢摸索的。IC50也是建议从5倍开始摸索。

3 回答1941 围观

问关于实验中高、中、低剂量分组时，数据的差异

loveliufudan

在动物或细胞实验中，出现不一致或混乱的结果可能是由于多种因素造成的。以下是一些可能的解释： 1. 剂量响应曲线的非线性：某些药物或化合物可能会表现出非线性的剂量-效应关系，即不同剂量下的效果可能不同。这可能是由于药物的机制复杂性或细胞的生理反应的非线性性质引起的。 2. 细胞或动物个体差异：个体之间的差异可能导致对剂量的响应不同。在相同剂量下，某些个体可能对药物更敏感，而其他个体可能对药物反应较弱

3 回答3563 围观

问培养增多人的软骨细胞具体操作方法及步骤

loveliufudan

当涉及到软骨细胞的具体培养方法时，以下是详细的步骤和操作：1. 细胞准备： - 从合适的来源（如人体骨骼或软骨组织）获得样本，通常需要手术或解剖获取。 - 将组织样本转移到含有生理盐水（PBS）的培养皿中，以保持组织的湿润。2. 细胞分离： - 用刀片或剪刀小心地将组织切割成小块，以增加细胞表面积。 - 将组织块置于含有消化酶（如胶原酶、DNA酶）的消化液中，通常在37摄氏度下进行

3 回答702 围观

问荧光定量检测CRP试纸，HOOK效应一般出现在什么浓度比较好？

sswei

当抗原抗体出现HOOK时经常会超出检测限而不能准确定量的检测出相关的数值，只有抗原抗体比例合适时才出现最强的反应，在检测限内检测出准确的数值。

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问wb实验在最下方loadibg处有条带，如何去除

loveliufudan

如果你在Western blot实验中发现一些不明的带，可能是由于一系列因素导致的，包括但不限于非特异性结合、蛋白降解产物、抗体的交叉反应等。以下是一些可能的解决策略： 1. 确认一抗的特异性：如果可能，尝试使用另一种一抗或者使用已知阳性和阴性对照来验证一抗的特异性。 2. 改变阻断条件：增加阻断时间，或者改变阻断液的组成。例如，如果你现在使用的是5%牛奶，你可以尝试使用5%BSA，或者使用含有T

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问edu染色488和33342为什么会这样啊

loveliufudan

可能是由于几个因素引起的： 1. 荧光染料渗透：有可能你的HOECHST 33342不仅染色了细胞核，也染色了细胞质。这可能是由于渗透作用，尤其是在高浓度或长时间孵育的情况下。 2. 细胞固定和渗透步骤：固定和渗透步骤对荧光染料的进入细胞内部起关键作用。如果使用的固定剂或渗透剂不恰当，可能会影响荧光染料的分布。 3. 具体的抗体或标记物：对于你的488染料，可能你的目标抗原主要位于细胞膜，而不是细

3 回答776 围观

问超声破碎的基因组dna怎么连接到我的质粒载体上，听说要修复加接头，怎么修复，接头是自己合成还是有专门试剂盒

huarenqiang5

接头建议使用专用试剂盒进行比较好。

3 回答357 围观

问PCR溶解曲线出不来这是什么原因？

huarenqiang5

考虑以下几点原因:1、引物没有设计好，溶解曲线就是为了区分样品是否有非特异性扩增和初始模板有无被污染的情况，实验室用BIOGHC-PCR检测了DNA，如果出现单一峰且峰值在Tm值位置出现，这就证明没有非特异性扩增，且初始模板没有被污染。2、没有给数据编号，数据在分析的时候需要分组。

3 回答3612 围观

问请帮忙讲解一下AAV DNA的滚环复制，单链是如何成双链的？

loveliufudan

滚环复制的基本过程： 1. 感染宿主细胞：AAV进入宿主细胞后，其单链DNA基因组会被宿主细胞核内的转录因子进行转录，形成mRNA。 2. 产生复制起始位点：转录过程中，AAV基因组的一个特殊区域，即基因组复制起始位点（replication origin），会形成一个短暂的双链DNA结构。 3. 倒转与剪切：复制起始位点的双链DNA结构会通过酶切和倒转的过程，将一个链剪切出来并倒转。 4. 合成

3 回答855 围观

问meta小白提问//药物对比生存率分析

huarenqiang5

不需要踢出，你可以直接在对照组数据录入0即可。

3 回答441 围观

问求助‖SDS-PAGE蛋白电泳结果怎么看呢？细胞裂解泡的条带有很多条，有的只有一条的呢？

loveliufudan

在一条泳道上看到很多条带，可能表示裂解液中的蛋白质多样性比较高。每条带代表一种或几种分子量相近的蛋白质。带的明亮度通常与该蛋白质的浓度有关，更亮的带表示该蛋白质更丰富。如果在一条泳道上只看到一条带，可能有几种解释： 1. 这可能意味着裂解液中只有一种主要的蛋白质，或者所有其他的蛋白质都在检测限度以下。 2. 如果这是一个验证泳道，可能表明你的抗体非常特异，只检测到了你感兴趣的目标蛋白。 3. 如果

3 回答6930 围观

问HFD联合多次小剂量STZ腹腔注射造模二型糖尿病，不成功怎么补注射？

loveliufudan

可以考虑以下几点： 1. 确认注射剂量和方法：确保使用的STZ剂量准确，并检查腹腔注射的方法是否正确。如果注射剂量和方法都正确，可能需要重新评估该模型的适用性。 2. 考虑增加剂量：如果血糖未达到预期水平，可以考虑增加STZ的剂量，但需要谨慎操作。剂量增加应该根据实验室经验、文献报道和动物伦理规定进行决定，并且需要密切监测小鼠的整体健康状况和血糖水平。 3. 考虑增加注射次数：如果单次注射未能诱导

3 回答1824 围观

问蛋白质提取率计算，关于总蛋白和提取液蛋白含量的测定方法？

sswei

考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h内保持稳定。反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定

2 回答1345 围观

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