实验问答

22,484,015 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

全部

细胞

问悬浮细胞总是在孵抗体和洗的时候被冲掉，悬浮细胞做免疫荧光怎么固定；

土井挞克树

悬浮细胞固定：细胞长好后一定固定好，非常影响后面拍片，4% 多聚甲醛、甲醇、丙酮均是可选用的固定液，固定时间在 10-15 分钟即可。记得之前用PBS清洗一次；另外可以使用PDL处理过的玻片，效果还行，很少脱片。

3 回答1043 围观

问荧光淬灭太快（几秒钟就消失了还没来得及拍就全黑了）可能是什么原因呢？该怎么改进呢？

土井挞克树

可加防荧光淬灭剂，或者你速度快点以及在激光照的时候再拍照，不拍的时候移开玻片

3 回答2304 围观

问当其中一个荧光信号很弱时，应该如何调整参数而不导致实验结果出现假阳性？

balalaLy

可以先拍实验组，然后再用同样的参数拍阴性对照组

3 回答148 围观

问铺细胞后24小时内会漂浮较多细胞这部分上清需要收集么（不是凋亡产生的漂浮）

balalaLy

如果是没有做任何处理的情况下出现这种情况，可能就是细胞不行，可能是存在污染，或者是细胞消化时间太长

3 回答374 围观

问cck8没有差异，流式检测凋亡后细胞早期凋亡率很高，什么原因？

balalaLy

这种结果算正常的，cck8能做出来的差异是属于晚期凋亡，早凋用流式可以检测出来，用cck8检测不出来。可以延长cck8的时间。

3 回答1199 围观

问胰酶没法预热吧？

balalaLy

建议分装使用，使用前可以37°加热

4 回答3984 围观

问请问annexin V与PI和与7AAD有何区别？

sswei

Annexin V分子量35KDa左右，是一种钙离子依赖性的磷脂结合蛋白，当细胞发生凋亡时，磷脂酰丝氨酸会从膜内外翻，Annexin V与外翻后的磷脂酰丝氨酸具有很高的亲和力，此时将FITC这种荧光蛋白标记在Annexin V上，便可以利用流式细胞仪进行检测。PI是核酸染料，不能穿过活细胞膜，当细胞膜出现破损时，PI可进入细胞并结合核酸。7-AAD （7-amino-actinomycin D）是

3 回答4322 围观

问单标样品的制备方法？不同实验目的或者目标细胞，单标的制备是否有差异？

sswei

不同实验目的，单标制备有一点差异。

3 回答262 围观

问各位老师好，正常组细胞坏死占10%-20%可能是什么原因，同样操作的用药组细胞坏死约6%，正常组坏死都偏高

sswei

可能的原因有正常组细胞冻存或复苏过程中损伤；培养液种有毒代谢产物堆积等。

3 回答321 围观

问各位老师好，请问看药物处理后看细胞的凋亡率是看早凋，晚凋还是总凋亡率？早调和晚凋有什么区别呢

土井挞克树

凋亡率计算是需要看早凋和晚凋的比值，早凋和晚凋的区别是主要是为了区分出细胞是正常凋亡和非正常凋亡

3 回答2623 围观

问培养含有kana和amp抗性DH5a有什么区别吗？这两种菌摇浑浊的时间不一样

balalaLy

没有什么区别，就是要分别加对应的抗生素，浑浊时间主要跟挑菌的数量以及细菌活性有关。时间长短没有什么影响的

4 回答1649 围观

问求助，鸡白痢沙门氏菌在ss琼脂培养基上的菌落形态，以及为什么会使ss培养基由红色变为黄色？

sswei

由于细胞代谢产酸，培养了细胞后的培养基会从红变黄。

3 回答2845 围观

问总蛋白可不可以作为实验组？为什么

feixue7758527w

总蛋白也是可以作为实验组的，但是也要看具体时间的，要注意排除混杂因素的，其他条件要一致。

4 回答239 围观

问细胞加药培养后有一块地方细胞死了，能直接提蛋白跑wb吗？

feixue7758527w

可以直接提取蛋白跑WB的，但是也要具体分析，排除污染导致死亡的。

3 回答3107 围观

问动物脱色脱脂是要先烘干弄成粉末，再加脱脂试剂进行脱脂吗

烧伤科常医生

我的经验是先烘干，然后再加脱脂试剂

3 回答255 围观

问DSS蛋白多寡聚体实验

是TTT

准备蛋白样品:用反应缓冲液稀释蛋白样品。准备交联剂：用DMSO溶解配制DSS溶液。在蛋白样品中加入DSS交联剂:交联剂终浓度为0.25～5mM。反应溶液室温孵育0.5-1小时。淬灭反应:加入20~50 mMTris终止交联反应，室温静置15分钟。洗涤样品，进行WB实验。

4 回答8236 围观

问蛋白条带上有黑色斑点，请问是什么原因

loveliufudan

出现黑色斑点可能有多种原因。以下是一些可能的原因和解决方法： 1. 抗体反应：可能是一抗或二抗与非特异蛋白结合，或者抗体自身发生了过度聚集。解决方法可以尝试降低抗体浓度，或者缩短孵育时间。3天的一抗孵育时间可能过长，通常过夜孵育就足够了。 2. 封闭液：如果封闭液未能完全覆盖滤膜，或者封闭液中的牛奶粉未能完全溶解，都可能引起斑点。应确保封闭液的制备正确，使用新鲜的封闭液，且封闭时液体充分覆盖滤膜。

3 回答1324 围观

问胶体金试纸条的金标抗体包被和T线抗体包被，为什么很多文献使用的是两种不同单抗，如果只筛选出了一种单抗

土井挞克树

因为两种抗体识别的抗原不同，为了保证筛选的有效性一般都是两种抗体

2 回答355 围观

问大肠杆菌倒入lb固体 37度培养后出现气泡

dxy_y2xcoxo3

你好请问楼主后面解决了吗气泡是因为什么原因产生了呢我也有

3 回答3287 围观

问抑菌圈到底是哪一个呢

dxy_y2xcoxo3

你好请问后来确定这个白色的圈是什么了吗

2 回答3245 围观

关于丁香通

公司信息

个人用户

企业机构

无忧采购轻松科研

提问

扫一扫

实验小助手

扫码领资料

反馈

TOP

打开小程序