实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问WB居然只出现标签条带

loveliufudan

首先，标签掉落是一个可能的原因。如果标签没有正确地与目的蛋白质结合，或者在转膜过程中丢失，那么您可能无法观察到您期望的目的条带。您可以尝试检查转膜条件是否正确，例如转膜时间和电流密度。另外，如果目的蛋白质表达水平较低，那么在凝胶中可能只能观察到较弱的条带。您可以尝试增加样品的负载量，或者尝试优化电泳和转膜条件以增强目的条带的信号。此外，实验中的其他因素，例如抗体的质量和稀释倍数，以及蛋白质的纯度和

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问求助:min细胞培养遇到的问题？

小芙fu

可能培养基问题细胞密度和传代比例

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问为什么胸腺嘧啶的最大紫外吸光度小于尿嘧啶

loveliufudan

尿嘧啶在紫外光谱中的吸收峰位较高，这是因为它的结构中包含了一个较为共轭的氮氧双键。这种共轭结构使得尿嘧啶对紫外光的吸收更为强烈。相比之下，胸腺嘧啶缺乏尿嘧啶中的氮氧双键，因此在紫外光谱中的吸收能力较低。胸腺嘧啶的最大紫外吸光度相对较小。这种差异可能与两种碱基的化学结构和电子共轭性有关，进而影响它们对特定波长的光的吸收能力。

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问RAW264.7诱导破骨细胞

loveliufudan

首先，对于未染色之前没有观察到典型的破骨细胞，可能是因为破骨细胞需要更长的时间来分化和形成。您在第6天进行TRAP染色，但有时需要更长的时间才能观察到明显的破骨细胞形成。您可以尝试延长培养时间，观察是否会出现破骨细胞的特征。关于染色后出现很多小细胞呈红色的情况，这可能有几种可能的解释。首先，这些小红色细胞可能是RAW264.7细胞的前体或早期破骨细胞，它们正在分化并准备形成成熟的破骨细胞。这可以解

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问统计学小白，请教关于多因素回归的问题

loveliufudan

你的研究问题涉及到多个因变量和多个自变量，这种情况确实需要进行多元回归分析。然而，选择哪种类型的回归分析取决于你的因变量和自变量的类型，以及你的研究问题。对于连续型的因变量，你可以使用多元线性回归。如果你的因变量是有序的，比如你提到的椎间盘退变分级，你可能需要使用有序逻辑斯蒂回归（ordinal logistic regression），这是一种专门用于处理有序因变量的方法。然后，对于自变量，你可

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问WB整膜一抗怎么敷

loveliufudan

通常分为两个步骤。以下是一般的步骤： 1. 样品处理和电泳：首先，您将蛋白样品经过电泳分离，并转移到膜上。这可以通过SDS-PAGE等方法完成。在转膜之前，您可以在凝胶中加入分子量标记物以便于确定目标蛋白的位置。 2. 阻断：转膜完成后，您需要对膜进行阻断（blocking），以防止非特异性结合和减少背景信号。常用的阻断剂包括牛血清蛋白（BSA）、脱脂乳清蛋白（skim milk）等。选择合适的阻

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问求问这个Wb是什么问题

loveliufudan

可能是由于以下原因之一： 1. 高背景信号：M型条带可能是由于非特异性结合引起的背景信号增强。这可能是由于阻断步骤不充分、一抗或二抗的过度浓度、阻断缓冲液或洗涤缓冲液中存在污染物等原因。您可以尝试优化阻断条件、减少一抗和二抗的浓度、更换阻断和洗涤缓冲液，以减少背景信号。 2. 交叉反应：M型条带可能是由于目的抗体与非特异性蛋白结合引起的。这可能是由于目的抗体与其他蛋白共有的表位结构相互作用。您可以

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问请问拿到了蛋白质TMT测序结果，如何挑选我想做的目的蛋白

loveliufudan

1. 数据分析和筛选：仔细分析TMT测序的结果，包括蛋白质的定量和鉴定信息。通常，测序结果会提供蛋白质的相对表达水平、统计学显著性和鉴定质量等信息。根据您的研究问题和兴趣，筛选出与您关注的信号通路、生物过程或疾病相关的蛋白质。 2. 生物学功能和相关文献：对所选的蛋白质进行生物学功能注释和相关文献调研。了解这些蛋白质的功能、亚细胞定位、相互作用伙伴以及已知的生物学意义，以确保选择的目的蛋白与您的

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问WB转膜为什么一张膜有蛋白，另一张没有呢

loveliufudan

可能有以下几个原因： 1. 转膜条件不均匀：转膜时，电流密度、时间和电场的均匀分布都非常重要。如果转膜条件不均匀，可能导致蛋白在膜上的分布不均匀。这可能是由于不同区域之间的电阻差异，或电泳槽中的电流不均匀分布等原因。您可以尝试优化转膜条件，确保电流均匀分布，并且蛋白能够均匀地转移到膜上。 2. 样品加载量不均匀：如果您在转膜之前加载的样品在不同区域上有差异，那么膜上的蛋白分布也会不均匀。确保在进行

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问wb转膜

loveliufudan

以下是一些可能的解释： 1. 技术操作：转膜是一项技术要求较高的实验步骤，操作的细节和技巧对结果影响很大。如果在转膜时对两张膜的处理方法、时间或压力有所差异，可能导致膜标记的质量差异。 2. 膜性质：不同的膜材料可能具有不同的性质，如亲疏水性、表面张力等。这些因素可能会导致某些标记更容易在膜上固定，而其他标记则可能难以固定或容易扩散。 3. 标记物的稳定性：不同的标记物可能在转膜过程中表现出不同的

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问求助！敲基因鼠跑WB的问题

loveliufudan

可能存在基因表达水平非常低的情况，无法通过常规的基因鉴定和PCR技术检测到。但是，在免疫印迹（Western Blot）实验中，可以通过放大和检测蛋白质水平来检测到这个基因的存在。

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问精子细胞上流式需要过筛嘛？急

烧伤科常医生

我的经验是，精子细胞上流式需要过筛

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问诱导多能干细胞

loveliufudan

第一代iPS细胞的培养通常是在铺饲养层之前进行的。铺饲养层的目的是为了提供一个适宜的细胞附着表面，帮助iPS细胞在培养皿中附着并生长。当铺饲养层形成后，初代iPS细胞可以被转移到上面进行进一步的培养和维持。

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问过表达慢病毒感染悬浮细胞不表达

loveliufudan

这种情况下，可以尝试以下方法来改善在悬浮细胞中的慢病毒感染效率和表达： 1. 提高感染效率：悬浮细胞通常比贴壁细胞更难感染。您可以尝试以下方法来提高感染效率： • 优化感染条件：包括感染剂的浓度、感染时间和感染温度等参数。您可以尝试不同的组合来寻找最佳条件。 • 使用增效剂：某些化合物或蛋白质可以增强病毒感染效率，例如聚乙烯醇（Polybrene）或微粒（Protamine sulfate）。您可

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问求助 | 2型糖尿病造模及代谢笼收集尿液过程中的问题

loveliufudan

对于构建二型糖尿病模型，一般会在动物中使用高脂饮食和低剂量的streptozotocin（STZ）来诱导糖尿病。在建模成功后，继续喂高脂饲料的目的是维持高血脂状态，以更好地模拟糖尿病和肾病的发展过程。高脂饲料维持高血脂状态的理由包括以下几点： 1. 模拟糖尿病肾病：高脂饮食有助于模拟糖尿病患者常见的高血脂状态，这是糖尿病肾病发展的一个特征。通过继续喂高脂饲料，可以更好地研究糖尿病肾病的发病机制和病

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问做了一年WB，gpx4趋势做不出来，甚至是反的，求大神指点

loveliufudan

以下是可能导致此问题的一些原因和建议： 1. 抗体选择：确保您使用的GPX4抗体质量良好，并且已经进行了充分的验证。验证抗体的特异性和灵敏性非常重要，可以通过使用已知GPX4表达的阳性对照样本来验证抗体的有效性。 2. 样本制备：正确的样本制备对于WB实验至关重要。确保样本处理和蛋白质提取过程正确无误。使用相同的样本制备方法和条件来比较不同条件下的GPX4表达。 3. 蛋白负荷量：确认您加载的蛋白

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问丙酮脱色脱脂后为什么还要用95%的酒精脱脂呢？再后面回流的目的是什么呀？

loveliufudan

丙酮和95%酒精的使用是为了脱色脱脂和去除脂质物质，而回流则是为了进一步的洗涤和去除残留物。这些步骤的目的是为了获得纯净的样品，以便进行后续的多糖和蛋白质提取。

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问为什么核酸的纯度是以OD260/OD280的比值作为检测标准？有没有其他的检测标准呢

loveliufudan

这是因为核酸在260nm处的吸光度最大，而蛋白质则在280nm处吸光度最大。因此，OD260/OD280的比值可以用来估计样品中核酸和蛋白质的相对含量，从而评估核酸的纯度。理想情况下，DNA的OD260/OD280比值应接近1.8，而RNA的比值应接近2.0。如果比值低于这些数值，通常表示样品中蛋白质的含量较高，即核酸的纯度较低。除此之外，还有其他的一些方法可以用来评估核酸的纯度和质量，比如凝胶电

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问电转导线性化质粒DNA酵母菌细胞

loveliufudan

有以下几个可能的解释： 1. 酵母菌DNA的相对稳定性：酵母菌细胞内的DNA相对稳定，不容易降解或受到损伤。即使未经过特殊处理，提取的酵母菌DNA仍然可以保持较高的完整性，使其能够作为PCR反应的模板。 2. 目的基因的丰度：如果您的目的基因在酵母菌细胞中的丰度较高，即使只提取少量的未经处理的酵母菌DNA，其中仍然可能含有足够多的目的基因片段，以在PCR反应中被特异性引物放大和检测到。 3. 引物

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问油菜基因怎么找到LK开头的名称呀

小芙fu

在ncbi网站上面直接搜索LK即可

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