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        用种子液提质粒的时候没有条带

        user-title

        小研同学吖

        用种子液做SDS-PAGE表达的时候条带粗细不稳定,整体上呈下降的趋势,最近一次做连条带都没有了,就做了个种子液提质粒,结果泡胶验证没有条带,测的质粒浓度大概在30左右,大家知道这个情况怎么回事嘛

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        4 个回答

        user-title

        dxyc42u

        有帮助

        很可能是质粒没有表达目的蛋白。

        user-title

        sswei

        有帮助

        可能存在蛋白之类的没有裂解干净。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        可能是种子液存在降解,可以更换样品试试看

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        有几个原因可以解释你在SDS-PAGE上看不到条带:

        1. 质粒表达问题:你的质粒可能没有正确地表达目标蛋白。这可能是因为启动子、核糖体结合位点或其他转录/翻译控制元件的问题。你可以尝试使用已知能够表达目标蛋白的其他质粒进行对照实验,看看是否可以看到预期的条带。

        2. 提取和纯化问题:提取和纯化过程可能没有正确地进行。这可能是由于缓冲液的pH值、盐浓度或其他条件的问题。请确保你正在使用的方法适合提取你的目标蛋白。

        3. 载样缓冲液问题:如果你的载样缓冲液中没有足够的还原剂(如β-巯醇或DTT),那么你的蛋白可能会形成二硫键交联的多聚体,这可能会影响蛋白的电泳迁移。确保你在样品处理过程中使用足够的还原剂。

        4. 泡胶问题:有可能是你的凝胶制备有问题,比如聚丙烯酰胺的浓度、TEMED和APS的量不对,导致蛋白无法正确运行。

        5. 电泳和染色问题:电泳条件不当或者染色剂(如考马斯亮蓝)使用不当,也可能导致看不到条带。

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