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        求助TEV蛋白酶菌株或者质粒求助TEV蛋白酶菌株或者质粒

        相关实验:利用植物蛋白质芯片研究蛋白磷酸化实验

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        Enthusiasm92TX

        求助TEV蛋白酶菌株或者质粒

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        3 个回答

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        土井挞克树

        有帮助

        我们实验室可以提供tev质粒。

        user-title

        于小鱼鱼1998

        有帮助

        我们实验室有TEV蛋白酶株,可以提供

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        loveliufudan

        有帮助

        可以提供以下几点建议:


        1. Addgene上有一些已发表的TEV蛋白酶表达质粒可以购买,比如pRK793、pMHT235等,使用较广泛。


        2. 也可以在NCBI的Nucleotide数据库中搜索TEV protease找到相关序列,设计引物克隆到质粒如pET系列载体中。


        3. 常用的TEV蛋白酶表达宿主菌株:

        - E.coli BL21(DE3):含有T7 RNA聚合酶,IPTG可诱导蛋白表达。

        - E.coli Rosetta: 编码稀有tRNA,帮助表达包含罕见密码子的蛋白。


        4. 表达条件的优化:

        - 降低温度至15-20°C可以提高融合蛋白的溶解性。

        - 小量IPTG (0.1-0.25 mM)诱导,降低毒性。

        - 加入可溶性标签如MBP标签,可以提高TEV酶的溶解性。


        5. 也可以尝试使用毕赤酵母、哺乳细胞等其它表达系统获活性TEV蛋白酶。


        6. 商业公司也售卖纯化的TEV蛋白酶产品。

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