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        利用植物蛋白质芯片研究蛋白磷酸化实验

        实验分类:

        植物学实验

        最新修订时间:

        简介

        鉴定蛋白激酶底物是蛋白激酶研究的一个主要焦点,并为解析信号转导途径及其复杂的调节提供证据。我们在此介绍一种以蛋白质芯片技术为基础的离体实验方法,用特异蛋白激酶对固定在芯片上的蛋白质进行系统磷酸化筛选。这种高通量方法可以用来鉴定可能的激酶底物。本实验来源「植物蛋白质组学实验指南」〔法〕H.蒂勒门特、M.齐维、C.达默韦尔、V.米琴主编。

        来源:丁香实验

        操作方法

        利用植物蛋白质芯片研究蛋白磷酸化

        3.1 非变性条件下重组激酶的纯化 用于磷酸化筛选的激酶必须是可溶和有活性的,且无其他激酶参杂的纯化激酶。因此,我们可以从 cDNA 表达文库中,大量生产和纯化组氨酸标记的重组蛋白质激酶,这些 cDNA 表达文库包括,用大肠杆菌载体 PQE30NST ( 检索编号:AF074376;22 ) 构建的大麦表达文库,或用 pQE30NASTattB 载体(检索编号:AY386205;23;也可见 2

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