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        蛋白多聚体解聚

        相关实验:利用植物蛋白质芯片研究蛋白磷酸化实验

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        小笼宝包

        最近在做水通道蛋白AQP4的WB以及ELISA实验,看了很多文章发现这个蛋白在膜上会形成非常大的正交粒子阵列,最高可达1000kda,由两种异构四聚体组成。做wb用sds变性后,除了目的蛋白的条带,还存在>250 kda的条带。我实验室MARKER最大

        图片描述

        也就这么大,且比我的目的蛋白带(约40kd)深得多,粗的多。所以怀疑是sds不能完全打开这种稳定的多聚体结构,也曾经在sds中额外添加巯基乙醇,基本没效果,跑出来条带跟之前一样。有没有懂的大佬,帮帮科研小白~

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        4 个回答

        user-title

        实验顺利425

        有帮助

        请问解决了吗 我也有这种情况 可以交流一下如何处理的嘛

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        土井挞克树

        有帮助

        看着像是多聚体聚集,建议用解构剂解聚开。

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        您在进行SDS-PAGE实验时发现除了目的蛋白外还存在其他大分子条带,这可能是因为SDS无法彻底解离AQP4的四聚体结构,导致四聚体残留在样品中。

        为了检测AQP4的四聚体结构,您可以考虑使用非变性条件下的电泳分离方法,例如蓝原胶酵母电泳(Blue Native PAGE)或者双向电泳(2D-PAGE)。这些方法可以保留蛋白复合物的整体结构,同时进行蛋白分离和检测。

        另外,您也可以尝试使用免疫印迹(Western Blotting)技术检测AQP4的四聚体结构。您可以使用针对AQP4四聚体结构的抗体,在非变性条件下进行免疫印迹分析。这种方法可以帮助您检测AQP4四聚体结构的存在和变化,并且可以同时检测单体和四聚体的存在情况。

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        z流沙z

        有帮助

        加入裂解液后,进行超声,然后加SDS buffer进行煮沸。

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