胰腺提取组织蛋白没有内参

1.转模板不平整，在内参的位置结合不紧密，导致内参蛋白没有完全转到膜上，可换平整的板试一试；2.抗体结合力较差，换个批次或者公司的试剂试一试；3.转膜时间不够或者过长，导致内参蛋白没能完全转到膜上或者转出膜外，调整时间试一试

你蛋白样本有没有加蛋白酶抑制剂？怎么保存的？保存了多久？上样是多少ug？一般来说只要上样1ug蛋白就能看到很明显的内参条带，假如蛋白有问题你是啥条带都看不到的。

可以从以下几个方面优化:

1. 调整裂解液配比,适当增大RIPA液用量,加强裂解强度。

2. 裂解过程中充分涡旋和反复提吸,帮助组织充分裂解。可以使用组织均质器增加效果。

3. 4°C条件下裂解,降低蛋白酶活性,防止蛋白降解。

4. 提高PMSF用量,例如提高到1mM,加强抑制蛋白酶。

5. 增加蛋白酶抑制剂种类,如E-64、青霉素等广谱蛋白酶抑制剂。

6. 裂解后高速冷却 centrifugation去除不溶物质。

7. 检查内参抗体的适用性,可试用GAPDH、β-actin等常用内参抗体。

8. 定量全蛋白,保证各样品上样总蛋白量一致。

9. 尝试不同的裂解液,找到最适合该样品的配方。

可能是你提取的过程有问题，可以用液氮研磨的方法快速裂解组织。