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        如何查找某个基因的基因沉默序列腺病毒?

        相关实验:RNA 介导的基因沉默实验

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        Havoc07QT

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        3 个回答

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        huarenqiang5

        有帮助

        基因沉默分为转录水平的沉默(TGS)和转录后水平的沉默(PTGS)。TGS是指转基因在细胞核内RNA合成受到了阻止而导致基因沉默;对于部分植物来说,转基因引发的基因沉默可能是因为基因特异的甲基化而导致;PTGS则是指转基因能够在细胞核里被稳定地转录,但在细胞质里却无相应的mRNA存在这一现象。RNAi、共抑制、 quelling均属于PTGS。

        病毒基因、人工转入基因、转座子等外源性基因随机整合到宿主细胞基因组内,并利用宿主细胞进行转录时,常产生一些dsRNA。宿主细胞对这些dsRNA迅即产生反应,其胞质中的核酸内切酶Dicer将dsRNA切割成多个具有特定长度和结构的小片段RNA(大约21~23 bp),即siRNA。研究表明在生物体中siRNA具相似的结构特征:为长约21~23bp的双链RNA,具5’单磷酸和3’羟基末端,互补双链的3’端均有一个2~3nt的单链突出。

          siRNA不仅能引导RISC切割同源单链mRNA,而且可作为引物与靶RNA结合并在RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRP)作用下合成更多新的dsRNA,新合成的dsRNA再由Dicer切割产生大量的次级siRNA,经过若干次的合成-切割循环,RNAi的作用不断放大,最终将靶mRNA完全降解。


          SiRNA 设计的原则


          1.从mRNA的AUG起始密码开始,寻找“AA二连序列,并记下其3端的19个碱基序列,作为潜在的SiRNA靶位点。有研究结果显示GC含量在30%-50%左右的SIRNA要比那些Gc含量偏高的更为有效。


          2.将潜在的序列和相应的基因组数据库(人或者小鼠,大鼠等等)进行比较,排除那些和其他编码序列/ST同源的序列。例如使用BLAST。


          3.选出合适的目标序列进行合成。通常一个基因需要设计多个靶序列的 SiRNA,以找到最有效的SiRNA序列。

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        loveliufudan

        有帮助

        要查找某个基因的基因沉默序列腺病毒,可以采用以下步骤:

        确定目标基因:首先需要明确要寻找的基因是哪一个。可以通过基因名称、序列等方式确定目标基因。

        搜索合适的siRNA序列:在已知目标基因的基础上,可以在公开数据库或商业供应商的网站上搜索合适的siRNA序列。siRNA是一种能够特异性沉默基因表达的分子,通常由21到25个核苷酸组成。在搜索时需要注意选择合适的靶点和siRNA序列,以确保siRNA对目标基因有特异性的靶向作用,并且不会对其他基因产生副作用。

        将siRNA序列插入腺病毒载体中:将找到的合适的siRNA序列插入腺病毒载体中,构建基因沉默腺病毒载体。

        体外或体内转染:将构建好的腺病毒载体转染到体外或体内的细胞中,使其表达siRNA序列,从而实现基因沉默的效果。

        需要注意的是,在进行基因沉默实验时,应该设置适当的对照组,以确保实验结果的准确性和可靠性。同时,应该对实验结果进行验证,确认目标基因的表达是否真正被沉默。

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        土井挞克树

        有帮助

        先要确定沉默基因,已知的基因可以在基因网站上搜,未知的只能阅读文献然后进行实验寻找

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