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        小鼠大脑CD31染色求助

        相关实验:大鼠大脑皮层神经元细胞培养实验

        user-title

        dxy_u55a5u13

        染小鼠大脑的CD31,冰切用的pfa固定

        切片厚度是10μm

        但是感觉染出来的不像是血管的样子

        求助血管cd31染色应该是什么样子

        怎么解决感觉图全是背景的问题呢图片描述

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        3 个回答

        user-title

        晓雨知春来

        有帮助

        血管染色,较薄的切片有助于减少背景信号和提高分辨率。你可以尝试使用更薄的切片,如6-8um,可以提高图像质量。

        user-title

        sswei

        有帮助

        用多聚甲醛固定的背景效果很一般,可以换VEcadherin。

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        如果你在CD31染色的切片中感觉没有明显的血管结构或图像全是背景,有几个可能的原因和解决方法:

        1. 固定问题:你提到使用了PFA进行固定,确保使用适当的PFA浓度和固定时间。过高的PFA浓度或过长的固定时间可能会影响抗体与目标结构的结合。优化固定条件可能有助于提高染色效果。

        2. 抗体选择和优化:确保使用经过验证的高质量CD31抗体,并按照推荐的抗体浓度和孵育时间进行染色。有时候需要进行抗体染色的条件优化,例如调整抗体浓度、孵育时间或使用增强抗体信号的方法(如二抗或荧光标记)。

        3. 切片厚度:你提到使用的切片厚度是10um。对于血管染色,较薄的切片有助于减少背景信号和提高分辨率。尝试使用更薄的切片,如6-8um,可以提高图像质量。

        4. 阻断和洗涤条件:适当的阻断和洗涤步骤对于减少非特异性结合和背景信号也很重要。确保充分阻断非特异性结合位点,并进行充分的洗涤以去除未结合的抗体和其他杂质。

        5. 影像采集和分析:在获取图像时,确保使用适当的显微镜参数和图像采集设置。分析时,可以尝试使用图像分析软件来提取和分析血管结构。


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