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        Annexin-FITC/PI染色 结果异常

        相关实验:原代细胞的脂类染色方法苏丹红Ⅲ染色法

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        两个半朋友

        用的是碧云天的试剂盒,每次只要染色了Annexin-FITC,FITC的荧光信号就会上升1-2个数量级(图1和图2),图1是空白对照,图2是未处理组+双染,图2的FITC明显比图1信号高很多,但是未处理也不应该会有这么多细胞凋亡的情况啊?这是为什么呢?

        图片描述

        图一

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        图二

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        4 个回答

        user-title

        sswei

        有帮助

        可能存在情况:

        1,细胞状态不好;

        2,细胞收集后存放的时间太长,没有及时染色;

        3,细胞表面原有的PS相对较多,应选用低浓度的AnnexinV标记;

        4,PBMC表面往往有血小板黏附在细胞表面,造成Annexin V阳性率偏高;

        5,过分吹打、震荡或胰酶消化等,可能使PS暴露出来。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        先排除看是否存在杂质细胞污染,如果凋亡太多可能是存在污染物质导致细胞群出现异常。

        user-title

        z流沙z

        有帮助

        染色过程中需要多步离心,因此操作十分重要,主要是要注意吹打混匀一定要轻柔,避免细胞物理损伤。

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        Annexin V-FITC/PI染色用于检测凋亡细胞,FITC染料用于检测细胞表面的凋亡标志物Annexin V,而PI染料用于区分凋亡和坏死细胞。如果您的实验结果显示FITC信号上升很多,而未处理组却没有明显的凋亡,可能是染色或实验步骤出了问题。以下是可能导致这种情况的一些原因:

        实验样本处理过程中的机械损伤或其他非凋亡原因导致了Annexin V的表达上调。在分离细胞或处理组织的过程中,如果细胞受到过度机械损伤,Annexin V表达可能会上调,导致假阳性结果。

        染色操作不当导致假阳性结果。如果您的染色操作不正确,可能会导致细胞假阳性,特别是如果您未能充分洗涤未结合的染料。

        染色试剂盒存在问题。虽然试剂盒经过了质量控制,但是仍有可能存在批次差异或质量问题,这也可能导致假阳性结果。

        建议您重新检查您的实验操作,包括样本处理和染色过程,以确认您的结果是否准确。如果您确定实验操作正确且结果异常,则可能需要考虑尝试其他方法来检测细胞凋亡,例如TUNEL染色或Western blotting。

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