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        【求助】annexin V /PI双染法测试肿瘤细胞凋亡

        相关实验:原代细胞的脂类染色方法苏丹红Ⅲ染色法

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        dxy_l96dbq99

        我做的是加入不同药物浓度处理肿瘤细胞。贴壁细胞加不同药物浓度处理24h后用含edta胰酶消化(应该用不含,但是没有就用它代替后清洗了),消化后pbs洗了2次,再加binding buffer及染色,做出来的结果基本全是活细胞,其他三个象限的几乎没有,药物浓度是根据ic50加的,甚至有的组增加了倍数,但每组都和对照组一样全是活细胞。图片描述

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        4 个回答

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        秋秋欣欣

        有帮助

        消化之前也要收集培养基中的细胞。

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        有几个可能导致细胞凋亡检测结果异常的因素:

        使用含有EDTA的胰酶消化细胞。EDTA可以螯合金属离子,包括钙离子,而钙离子是细胞凋亡过程中的关键调节因子。如果细胞被EDTA螯合,可能会影响细胞凋亡的发生和检测。

        细胞洗涤的过程中,离心时间和速度是否一致。离心时间和速度不一致可能导致部分细胞沉淀不下来,从而影响染色结果。

        细胞浓度是否过高。如果细胞浓度过高,细胞间的相互作用可能会影响细胞凋亡的发生和检测。

        Annexin V/PI染色方法的特异性和灵敏度。染色试剂的质量可能会影响染色效果,建议使用经过验证的试剂盒。

        为了解决这些问题,您可以尝试以下措施:

        使用不含EDTA的胰酶消化细胞。

        在洗涤过程中保持离心时间和速度一致,以确保所有细胞都可以沉淀下来。

        调整细胞浓度,以确保细胞间的相互作用不会影响染色结果。

        确保使用的染色试剂是经过验证的高质量试剂。

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        土井挞克树

        有帮助

        药物浓度不够,所以没有筛选出来,应该提升药物浓度

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        z流沙z

        有帮助

        可以用cck8再摸索一下药物梯度,另外正式实验时也需要阳性对照和阴性对照

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