• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        一、二倍体细胞培养法

        相关实验:特殊细胞培养实验

        最新修订时间:

        原理

        二倍体细胞来源体内二倍体细胞,也即正常细胞的初代培养。初代培养细胞成功后能始终保持二倍体细胞性状,便成为二倍体细胞培养。

        二倍体细胞虽不难培养,但欲求
        长期呈旺盛地增殖生长、并保持二倍体细胞性状,亦非易事。为此必须采取一些有效的措施,一是低温冻存,二是妥善的培养方法。

        用反复传代的方法以求获得大量细胞和维
        持细胞长期生存的办法是不妥的。因在反复传代中,难免由于培养条件的变化和其它不利影响,使细胞生物学性状发生变化。随时间延长不仅能导致细胞停止生长,并可失掉二倍体性状或发生转化。

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        二倍体细胞培养方法与一般培养相同,关键在于传代,其传代程序为

        1.  吸除旧培养液注入另瓶中;

        2.  用BSS冲洗1 次;

        3.  用0.25%胰蛋白酶消化,加入消化液量以仅覆盖住细胞层即可;作用1~5 分钟;

        4.  待细胞附着松动、细胞质边缘卷起和间隔加大,便终止消化;为防止细胞丢失可不必再用BSS冲洗,直接向瓶中加入培养液(新旧培养液按2:1)新旧混合;

        5.  轻轻反复吹打制成单个细胞悬液(消化不足或吹打不充分,易形成细胞团,不利于生长,应注意避免);

        6.  按一分为二比例接种培养。

        常见问题

        一、要点

        1.  采取以下措施可能利于二倍体细胞培养

        (1)严格控制pH值,最好在5 %CO2温箱中培养;

        (2)换液时间不要间隔太长,且不要全部更新,尽量保留一部分旧培养液,以弃掉1/2或2/3为妥;

        (3)传代期不能过长,不能让细胞长得过于密集,一旦细胞接近或刚刚连接成片,即进行传代;

        (4)要选用高质量的培养基和血清,并尽量维持不变,每次传代都按一分为二的原则(细胞数量、营养液量、培养瓶的空间和面积都不得一样)进行培养;

        (5)传代后如细胞不用于实验,立即低温冻存。

        2.  来源于胚胎的二倍体成纤维细胞平均分裂 50 次左右即进入衰退期。

        不同种类和来源的二倍体细胞生存期都不一样,但生存期皆有限。

        虽然二倍体细胞具有限的生存期,却完全能满足反复使用的要求。

        以成纤维细胞为例,即便从初代接种1 个细胞算起,按产生的细胞数=n×2n(n=接种细胞数)计算,它所提供的细胞也近天文数字。而在实际应用上,初代接种的细胞都几十万以上,因此一个二倍体细胞系最终提供的细胞数量近于无限的。

        二、讨论

        如何能保留有大量可利用的二倍体细胞?首先在初代二倍体细胞培养时,要接种多量细胞;生长成功后立即冻存做为种细胞( Stock)。用于实验时,解冻1 分Stock,传1~3 代,按下式处理:

        一、二倍体细胞培养法

        据上,可见二倍体细胞是可长期应用的。

        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序