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        为什么不能用质粒DNA来提取基因组DNA?

        相关实验:DNA 降解断裂法检测肿瘤细胞凋亡

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        丁香清香

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        3 个回答

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        bamboopiggy

        有帮助

        不能混用,因为两者原理不同:

        1,质粒抽提
         质粒抽提通常用的是碱裂解法,Solution I一般都是用来重悬菌液的,会加入RNase I,降解掉里面大肠杆菌的RNA。同时里面还会用Tris-HCl体系来维持一个pH,另外会加入较大量的EDTA,去螯合掉里面的二价金属离子,使菌体本身的DNase失活。Solution II,一般来说主要成分有两个,就是NaOH和SDS,NaOH主要是用于破坏细胞膜结构,强碱条件下,菌体的细胞壁结构,细胞的磷脂双子分层和微囊结构的构相都会发生变化。而SDS在这里主要并不是起到裂解蛋白的作用,而是结合氨基酸,一般两个氨基酸可以结合一个SDS分子。菌体裂解后,其实小片段的质粒已经释放出来了,而大片段的基因组DNA还结合在蛋白质上。
        Solution III的主要成分是醋酸钾/醋酸缓冲液。首先长时间强碱环境下,DNA会断裂,所以需要醋酸进行中和。而钾离子可以与SDS产生沉淀反应,是可溶于水的十二烷基磺酸钠变成不溶于水的十二烷基磺酸钾。这样结合蛋白的SDS就被沉淀下来,同样基因组DNA也被沉淀下来。用硅胶吸附释放在上清里的质粒,或者用无水乙醇对上清进行沉淀,即可得到质粒DNA。
        基因组DNA抽提
        首先是裂解,用离子型的蛋白变性剂:CTAB或者SDS对细胞进行裂解(加不加蛋白酶K其实并不太要紧),破膜的同时使得DNA从蛋白上解离下来。加入高盐溶液使蛋白质沉淀。然后用酚仿,使蛋白质沉淀变性在水相油相间,并分离出的可溶性蛋白。上清用异丙醇将DNA沉淀下来,同时低温加入一定量的一价阳离子,可加速DNA沉淀。

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        质粒DNA的提取比基因组DNA提取更复杂一些,因为要在提取的过程中避免基因组DNA的污染。如果质粒DNA要用于转染(transfection)或者离子交换(anionexchange),质粒还需要额外处理。

        user-title

        未来9

        有帮助

        基因组DNA的抽提,一般不会用到质粒抽提的试剂盒,原因是由于两者的原理完全不同

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