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科研学霸天团，48小时有问必答

问为什么要热灭活血清？

土井挞克树

热灭活目的是为了去除血清中补体等对热敏感的物质

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问细胞内的蛋白如果暂时没有时间提取，可以先把细胞离心取沉淀然后冻起来，等有时间再提吗？

loveliufudan

是的，将细胞离心取沉淀并在冷冻保存之后，可以在以后的时间点进行蛋白质提取。事实上，这是一种常用的技术，在许多实验室中被广泛使用。当细胞被冻结时，其代谢活动会停止，因此细胞内的蛋白质也会停止活动并保持在原位。然而，应该注意到，蛋白质可能会发生不可逆的变性和降解。因此，在冻结细胞前，最好根据需要的蛋白质提取方法对样品进行预处理，并使用适当的缓冲液和保护剂以保护蛋白质。在提取蛋白质之前，需要将冷冻的细胞

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问稳定表达某种蛋白的293T细胞培养时加入的G418浓度是多少，要用筛选浓度吗，还是维持浓度就行？

百疠辟易

HEK293T细胞有G418抗性，是筛不出稳转细胞系的。换个细胞系或者质粒换个抗性吧。

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问MDBK细胞需要用什么培养基培养，血清比例是多少？是贴壁细胞吗，需要胰酶消化吗？

土井挞克树

细胞特性　　1）来源：牛肾正常细胞　　2）形态：上皮细胞样，贴壁生长　　3）含量：>1x106细胞数　　4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装　　5)用途：仅供科研使用。培养基及培养冻存条件准备：　　准备1640培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。　　2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。　　3）冻存液：90%血清，10%DMS

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问急问！！三组独立样本但有两个重复，是用两两t检验还是单因素方差分析？

loveliufudan

对于您提到的这种情况，建议使用单因素方差分析来分析这三组数据，而不是多次进行两两 t 检验。单因素方差分析可以比较三组或以上的样本均值是否显著不同，同时还可以检验不同组别之间的交互作用，比如模型组与治疗组的交互作用。在您的情况下，对照组与模型组之间的比较可以作为交互作用的一部分考虑，因为模型组与治疗组的差异可能取决于对照组的胆固醇水平。非参数检验也可以用于这种情况， Mann-Whitney U

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问请问大家transwell这个背景怎么消除呢

huarenqiang5

预处理好的细胞用胰酶进行消化（一般用6孔板进行前期的一个转染、加药等预处理操作），用PBS重悬清洗细胞，避免血清的干扰，使细胞处于一个无血清的环境。

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问求助】293T细胞培养过程中，能否直接换血清？

简简单单的8872

建议冻存之前，按比例逐步更换血清。复苏后细胞不贴壁可能与血清不适有关系，也可能跟冻存前细胞状态、所用冻存液相关。若需更换血清，建议冻存前逐步更换，完全适用后再进行冻存。

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问求vx2瘤珠

土井挞克树

再次注射，可以适当增加注射位点。

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问求助如何测量大鼠颏舌肌肌电

huarenqiang5

用BL-420E+生物机能实验系统对SD大鼠颏舌肌进行肌电检测，检测指标为：动作电位、平均频率、最大频率、积分幅度、最大幅值。

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问md3000E生物信号采集处理系统

土井挞克树

需要肝素盐水润管的不然会很快凝血

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问求助！脂肪干细胞原代消化完是一坨组织（如图），请问该怎么处理

loveliufudan

根据您提供的描述和照片，可能是消化不充分导致的。建议可以尝试以下几点进行处理：调整消化时间和胶原酶浓度：消化时间和胶原酶浓度可能需要进行调整，具体情况可以参考文献或者与其他实验室的同行交流。在消化时，可以尝试将消化液在细胞培养箱内进行消化，保证环境的恒温和恒湿。加强摇匀：在消化过程中，需要不断的轻轻摇动或摇匀消化液，确保消化液均匀分布。过筛：消化完后可以通过70 μm或者100 μm的滤网过筛，将

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问请问配置1mmol/l的NaF培养基怎么配置？怎样保证加入的NaF是无菌的(因为称重的称还有一些东西不是无菌的。)

努力搬砖的小凡

可以使用DMSO将NaF配置成母液为1 M的，然后根据实验所需向培养基当中加入一定量的1 M的NaF,使得NaF在培养基当中的终浓度为1 mM,此时在培养基当中的DMSO不超过千分之一，理论上对细胞的生长不会出现显著性的影响，希望对你有所帮助。

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问image J merge怎么用？有没有大神帮我看一下这个merge的程序哪里有问题，我怎么跑不起来，桌面就是在D盘里的

简简单单的8872

找image J压缩包所在位置，解压后，直接打开 imageJ.exe文件即可

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问BT-549细胞刚开始养长的挺快状态也可以，传了几代之后就长慢了，为什么？

土井挞克树

可能是营养消耗殆尽了，需要增加营养血清。

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问三阴性乳腺癌细胞株有哪几种？

loveliufudan

三阴性乳腺癌是一种不表达雌激素受体、孕激素受体和人表皮生长因子受体2（HER2）的乳腺癌。目前已知的三阴性乳腺癌细胞株包括但不限于以下几种：MDA-MB-231：这是最常用的三阴性乳腺癌细胞株之一，具有高度侵袭性和转移性，用于研究乳腺癌细胞的增殖、侵袭和转移机制。MDA-MB-468：这是另一种常用的三阴性乳腺癌细胞株，表现出较强的浸润和侵袭能力。BT-20：这是来源于乳腺癌患者的三阴性乳腺癌细胞

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问pcr验证HBV的复制情况可以检测哪些指标

此用户已注销

是HBV-DNA，这个是乙肝病毒存在直接的依据，HBV-DNA是乙肝病毒复制的标志，评价乙肝病毒复制水平，传染性强弱、药物疗效的指标这个是检测的金标准。。

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问麻醉科能做什么和细胞培养的课题吗？

上山打老虎11111

麻醉科还是建议结合麻醉药物，可以做下对细胞生长、细胞生物学行为的影响，建议结合上动物实验

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问如何去除培养皿中的成纤维细胞(杂细胞)?

dxyc42u

诱导成纤维细胞使其失去贴壁习性，然后去除培养基

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问复苏了RAW巨噬细胞培养，用15%DMEM，可是长的好慢，没有明显操作失误，马上就要做转染，郁闷啊，求助高手，谢谢！！

huarenqiang5

主要考虑培养条件、培养基、血清、细胞这些是否存在问题。建议从这几方面找问题。

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问细胞培养基中加入的双抗多了或者少了会有什么影响

huarenqiang5

双抗加太多或太少，主要是影响细胞生长。

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