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科研学霸天团，48小时有问必答

问求助大鼠杏仁核取材方法

龙大人驾到

大鼠杏仁核取材需要先行动物体内注射麻醉剂，确保大鼠无痛苦，并进行以下步骤：1. 用生理盐水洗涤大鼠头部，以除去外表的污垢和细菌。2. 制备一支大鼠取材钳（也称为显微取材器），将其用70%乙醇消毒并放入PBS缓冲液中。3. 将大鼠固定在取材架上，使用手术刀在头部处进行切口，直至完全暴露出颅骨。4. 使用电动钻钻开颅骨，注意不要损伤杏仁核。然后，通过使用细长、平底的巴氏手术刀，切割硬脑膜，揭露出杏仁核

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问最近在做NCI-H716分泌GLP-1的实验请问基质胶稀释多少倍？

土井挞克树

以24孔板为例，做实验时每孔加入基质胶20-30ug（一般配成200-300ug/ml的工作浓度，然后每孔加入100ul即可）。此时，基质胶是100ul即可）。此时，基质胶是稀释到很低的倍数（有的实验需要低至30倍稀释，具体最适浓度需根据自己的实验进行优化）。铺胶后置于37℃提升箱放置1小时，取出后如果上层有液态提升基，需小心弃去上层的液态提升基即可使用（此时基质胶沉在底部形成一小薄层）。

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问THP-1诱导失败无数次，跪求高人指点？

土井挞克树

pma的终浓度一般在100ng/l。

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问细胞饥饿时间12小时还是24小时哇

loveliufudan

细胞饥饿时间会因细胞类型和实验目的而异。一般来说，常规的细胞饥饿时间为12至24小时，但也有研究表明某些细胞需要更长的饥饿时间才能观察到所需的效果。因此，建议您先在文献中查找相似实验条件下的饥饿时间，并据此选择适当的饥饿时间。如果您无法找到相似实验的文献，可以从12小时开始尝试，然后再逐步延长饥饿时间，以确定最适合您的实验条件的饥饿时间。同时，建议您在实验中根据细胞的生长情况和细胞死亡率进行监测，

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问3t3诱导：图1：诱导第六天，为什么细胞不变圆而是胖梭形？第一次诱导时间太短？图2:诱导第十天，这些白色小点是脂滴吗？也是梭形

土井挞克树

考虑是细胞内的梭形脂滴，延长第一次诱导时间看一下

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问请教下大神，大家用的茜素红染色液是买的配好的溶液还是粉剂呢？有推荐的吗？另外酸性/中性/碱性都有，哪一种适合染培养细胞的矿化结节？

huarenqiang5

一般是购买茜素红素粉，然后自己进行配制，茜素红S 1g 蒸馏水 90ml 1%氢氧化铵 10ml此液PH值应在6.3左右，此溶液至少可保存1个月。

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问流式中，标记的抗体已经验证过，但却无法正确鉴定特定类型的免疫细胞。我该怎么确定鉴定的准确性？

sswei

如果是外周/脾脏/淋巴结的免疫亚群鉴定，在进行红细胞裂解或者梯度密度离心后所获得细胞都是纯度非常高的PBMC，可以在流式细胞仪上通过FSC和SSC这2个形态学通道明确的选出免疫细胞。但一些病人的样本或者是一些处理不好的样本，很难从FSC和SSC通道上获得明确的PBMC形态，此时就应该检测CD45来严谨的gate出免疫亚群了。

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问已知四个组数据的样本量，以及平均数±标准差，怎么能够得到汇总的平均数±标准差

loveliufudan

要计算四个组数据的汇总平均数和标准差，可以使用加权平均数和加权标准差。假设有四个组数据，它们的样本量分别为$n_1, n_2, n_3, n_4$，平均数分别为$\bar{x}_1, \bar{x}_2, \bar{x}_3, \bar{x}_4$，标准差分别为$s_1, s_2, s_3, s_4$，则汇总平均数和标准差的计算公式为：汇总平均数 = $\frac{n_1\bar{x}_1 + n

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问免疫荧光共定位，需要做半定量分析吗？

loveliufudan

共定位分析可以检测两个蛋白是否在同一亚细胞定位，并可以通过免疫荧光染色来直观地观察它们的共定位情况。但是，如果需要证明这两个蛋白之间的共定位程度的强度或数量关系，就需要进行定量分析了。定量分析可以使用图像处理软件或其他定量方法，比如荧光标记的蛋白质在细胞中的比例或共定位区域的面积等。虽然免疫荧光染色本身存在一定的局限性，但是通过标准化的实验流程和准确的图像分析方法，可以获得可靠的定量结果。所以，如

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问测细胞培养上清液的葡萄糖和乳酸浓度，上清液可以冷冻保存回收，之后解冻再测吗

loveliufudan

通常来说，细胞培养上清液可以冷冻保存并回收，但在解冻并重新测量之前，需要注意以下事项：冷冻保存时，应将上清液储存在低温（通常为-80℃）和无菌的环境中，以避免其被污染或失活。在重新使用之前，需要确认上清液的冷冻和解冻过程没有对其葡萄糖和乳酸浓度产生影响。这通常可以通过比较解冻后的样本和之前测量的样本进行分析。在解冻之前，建议将上清液缓慢地放置在冰箱中解冻，以避免温度变化过快对样本造成损害。重新测量

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问细胞培养

huarenqiang5

这个情况你可以试试把培养液全部倒掉，用PBS洗2遍后，再加入新的培养液。

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问干细胞复苏后自己分化成骨了吗

huarenqiang5

你这细胞形态不太好，已经分化成骨了。

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问求助怎样确认小鼠肠系膜上动脉阻断成功

土井挞克树

戊巴比妥钠或水合氯醛腹腔注射对肠道影响很小，几乎不影响造模

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问请教小鼠脾T细胞培养和测凋亡问题

loveliufudan

1.在体外培养T细胞时，增殖通常伴随着一定数量的细胞死亡。细胞死亡可以是由于培养条件不佳、培养基中某些成分的缺失、过多的细胞密度等多种因素引起的。在增殖时，细胞会逐渐增多，并且可能会部分集中在周边。细胞数量的增加和聚集现象可以通过显微镜观察到。通常，为了避免过度增殖和细胞死亡，建议根据实验需要调整细胞密度和培养条件，比如更换培养基、降低细胞密度等。2.从您提供的图片来看，凋亡图看起来可能存在一些问

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问基质胶3D培养干细胞时，如何提取干细胞外泌体

huarenqiang5

操作步骤：1)采用含血清培养基培养干细胞，培养至一定时间；2)然后提取干细胞，将干细胞放置在不含血清的培养基中，培养至一定时间；3)将步骤2)中的不含血清培养基中的干细胞进行分离，对干细胞进行培养，将细胞培养后的培养基，离心去除杂质；4)将经过步骤3)中提取的外泌体提取液和含血清培养基液混合后进行培育，培育后得第一孵化液，对第一孵化液进行离心浓缩，得到含外泌体的浓缩液；5)通过设置将步骤4)中含外

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问请问师兄师姐们，Trizol 法提取 RNA，加入氯仿后白膜糊在ep管上怎么处理。

土井挞克树

静止后再提取，考虑还是有析出。少量析出不影响

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问我想问一下微球体是什么实验

龙大人驾到

微球体实验是一种实验方法，用于研究微小颗粒物质的性质和行为。该实验主要通过制备一种具有特定大小、形状和表面性质的微小球体，然后使用不同的测量技术和设备来研究其物理、化学和生物特性等方面的信息。这种实验方法可以应用于多个领域，如材料科学、生物医学、环境科学和纳米技术等。

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问大提质粒时，洗脱液qf可否用dd水代替

dunima

后续直接测序的话，可以代替，但要保证pH中性

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问冰冻切片组织脱水方式及时间如何确定

huarenqiang5

脱水：依以下酒精梯度进行脱水，30%乙醇→50%乙醇→70%乙醇（关键步骤：可当日2H也可过夜）→95%乙醇1→95%乙醇2→无水乙醇。根据不同组织大小和类型调整脱水时间，对于小鼠肝组织95%乙醇控制在30min-1H，100%乙醇5min-30min。

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问HE染色失败，找原因及补救方法

dxy_5kz0zll2

低浓度开始多换几次，这样可防止组织脱水过度造成扭曲。如果时间紧凑，可从95%乙醇开始，接着行无水乙醇脱水。通常的方案是从60%～65%乙醇开始，换2次95%乙醇，2次无水乙醇。

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