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科研学霸天团，48小时有问必答

问大鼠原代骨髓间充质干细胞培养时如何避免污染？近期提的一批细胞有两皿出现了污染。再请教大家，鉴定BMSC的经典marker有哪些？

sswei

细胞培养所用物品清洗、消毒要彻底，各种溶液灭菌除菌要仔细，并在取样检菌一周后确认无菌才能使用。同时，在无菌过滤操作中，随着滤过体积的增大，滤膜破损的可能性增加，故应选择最后过滤的液体进行检测。各种抗生素性质不同，对各种微生物的作用也不同，联合应用比单用效果好，预防性应用比污染后使用好。但反复使用抗生素会使微生物产生耐药性，且对细胞本身也有一定影响，因此为避免诱导抗药细菌，应定期更换培养系统中的抗生

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问细胞实验，每次都出现大量细胞漂浮原因？

sswei

漂着的细胞可能是还没贴壁的活细胞，也可能是死细胞。可以再培养一段时间看看是否贴壁细胞数有所增加或者往培养基中多加一些血清来促进贴壁。可能由消化过度引起。如果一段时间后还是没贴壁，那说明细胞生活状态比较不好或者细胞死亡了。这可能是由于细菌污染引起的，由镜检观察视野中是否有杂菌判断。如果不是很珍贵的细胞，就重新复苏一管吧。

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问转导后的CHO-K1，想问一下这是细胞碎片还是污染了？

sswei

在细胞培育的过程中发现有黑点生成，在镜下观察细胞，生长状态良好，与黑点呈现前相比。没有任何变化，那么，黑点的呈现可能与细胞生长过老，破碎的细胞残骸有关。

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问细胞刮痕实验一般用多少血清的培养基？

sswei

一般用<2%血清培养基，在适当的时间点，如0，6，12，24小时后取出细胞，在显微镜下观察并拍照。

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问病毒转化的肿瘤细胞是什么意思？

土井挞克树

不建议用msb1，msb1和ALVJ之间几乎不存在相关关系，没有意义。

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问小鼠脑微血管内皮细胞长得很慢。

z流沙z

可以把FBS增加到15%，另外传代时细胞密度不要太低

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问请问总样本量63，阳性例数15，自变量3个，可以做二元logistics回归吗

土井挞克树

可以做，但是这个样本量考虑误差太大，不一定能做出阳性结果

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问LLC细胞系BALB/C小鼠成就

sswei

当细胞生长到一定程度时，会自动产生反馈，使抑癌基因高表达，癌基因不表达或低表达。

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问求问水中微生物

偶然必然BMC5

鸡身上的一种寄生虫，蛔虫，钩虫

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问【求助】请问哪位师兄师姐能提供TM4细胞，就是小鼠睾丸支持细胞，求求啦🥹

土井挞克树

我之前做生精实验的时候用过睾丸支持细胞，可以交流

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问什么是ac螺旋

loveliufudan

AC螺旋，实际上是指A螺旋和C螺旋组成的结构单元。C螺旋位于EGFR的中心区域，与A螺旋相邻。这种AC螺旋结构被认为在EGFR的结构和功能中起着重要作用，例如与EGF结合和受体激活等过程中都涉及到该结构单元。需要注意的是，由于EGFR结构是一个高度动态的体系，AC螺旋结构可能不是一成不变的，可能会受到多种因素的影响而发生变化。

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问想收集内皮祖细胞条件培养基用于培养内皮细胞

sswei

内皮细胞培养的时候对培养基的要求很高，必须要使用MCDB这种不是很常规的基础培养基，然后加血清，加EGF,加胰岛素才能好好生长。

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问软骨细胞提纯

Dr_劉医生

应该是死亡的细胞碎片。软骨细胞纯度可以用流式、台盼蓝染色等检测。软骨细胞提纯方法有很多种，其中一种是通过离心收集细胞，预冷1×PBS 500ul重悬洗一次，转至500ul EP管（2000rpm×5min），去上清，后甩一次，将上清去尽，按每1×106的细胞加50ul loading buffer 加入2×loading，Vortex一下，煮10～15min一次×2～3次直至无粘丝，每次煮好将其放

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问大鼠TAC主动脉弓缩窄术用多少G的针头？

土井挞克树

我一般选择26G的针头进行主动脉弓缩窄术，效果不错

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问乳鼠大脑HE染色的小小困惑

土井挞克树

考虑组织在水浴锅停留时间太长变性了,建议减少水浴时间

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问786-0细胞

土井挞克树

胰酶的浓度是多少，大量漂浮考虑消化过度，需要降低胰酶的浓度。

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问THP-1单用lps处理No值为什么和control差不多

土井挞克树

考虑是lps的浓度过大或者处理时间过长才会导致NO值变化这么大

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问请问各位大神这些黑点是支原体污染了吗？还是说是死细胞团呢？🙏

灰灰加油干

支原体肉眼看不见。目测应该是细胞团块。如果你的细胞生长缓慢，背景变脏，就需要考虑是不是支原体污染。可以使用PCR法或者试剂盒的显色法进行判断。

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问脑缺血再灌注的大脑中动脉阻塞阻塞模型做透射电镜切片取哪个部位最佳呢

Dr_劉医生

一般选择大脑皮质作为切片的部位。

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问请问在磁性活化细胞分选（MACS）试验中，剩余的未与细胞结合的磁珠如何与磁细胞分离开来？

Dr_劉医生

在MACS分选中，未与细胞结合的磁珠可以通过磁场分离。MACS分选是基于细胞表面抗原能与连接有磁珠的特异性单抗相结合，在外加磁场中通过抗体与磁珠相连的细胞被吸附而滞留在分选柱内，而无该种表面抗原的细胞由于不能与连接有磁珠的特异性单抗相结合而没有磁性，不在分选柱内停留，进而使细胞得以分离。因此，未与细胞结合的磁珠可以通过磁场分离。

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